Overview
تصف هذه المقالة الاستجابة السلوكية لسمك الحمار الوحشي للمركبات السامة من خلال مراقبة حركة اليرقات. وينظر البروتوكول كذلك في مثال على استجابة يرقات سمك الحمار الوحشي للملوثات البيئية.
Protocol
1. التحضير لاختبار السلوك
- نقل 800 ميكرولتر من محلول التعرض إلى كل بئر من 48 لوحة صغيرة جيدا.
ملاحظة: استخدم 16 بئرا لكل مجموعة (أي حل التحكم و5 ميكروغرام/لتر و50 ميكروغرام/لتر). - استخدم طرف ماصة 1 مل لنقل 200 ميكرولتر من محلول التعرض مع يرقة واحدة من طبق بيتري الزجاجي إلى بئر واحد من 48 لوحة صغيرة جيدة.
- نقل 4 مل من محلول التعرض إلى كل بئر من 6 ميكروبليت جيدا.
ملاحظة: استخدام واحد 6 لوحة صغيرة جيدا لكل مجموعة. - استخدم طرف ماصة 1 مل لنقل 200 ميكرولتر من محلول التعرض مع يرقتين إلى كل بئر من اللوحة الدقيقة 6 جيدا.
ملاحظة: كل مجموعة لديها ست مجموعات مكررة. - تأكد من أن درجة حرارة غرفة الاختبار هي 28 درجة مئوية 2 ساعة قبل الاختبار.
ملاحظة: عادة ما يتم إجراء الاختبارات السلوكية في فترة ما بعد الظهر.
2. اختبار زاوية الحركة والمسار
- حفظ البروتوكول وإيقاف ضوء غرفة الاختبار.
- تأقلم اليرقات في النظام لمدة 10 دقائق وانقر على زر"التجربة""التنفيذ" بدوره ، ثم اختر المجلد الذي يتم فيه حفظ ملفات التجربة وأدخل اسم النتيجة.
- انقر فوق الزر"الخلفية""ابدأ"بدوره لبدء الاختبار.
- انقر على زر"التجربة""إيقاف"بدوره لإيقاف التجربة عند انتهاء الاختبار.
ملاحظة: يعرض النظام البيانات التي تم اختبارها عند توقف النظام. وتشمل البيانات المسافة المتعقبة في ثلاث فئات السرعة وأرقام زاوية المسار في ثماني فئات زاوية من كل دقيقة. بالنسبة لاختبار الحركة في المثال المعروض ، يتم حساب المسافة الإجمالية في كل فترة ضوئية (10 دقائق) والفرق بين مجموعة التحكم ومجموعات العلاج مقارنة. - نقل 48 لوحة صغيرة جيدا مرة أخرى إلى حاضنة الضوء لتجارب أخرى.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 48-well-microplate | Corning | 3548 | Embyros housing |
| 6-well-microplate | Corning | 3471 | Embyros housing |
| Zebrabox | Viewpoint | ZebraBox | Behavior instrument |
| ZebraLab | Viewpoint | ZebraLab | Behavior software |
| Pipette | Eppendorf | 3120000267 | Transfer solution |
