Larvrörelseanalys: Hög genomströmningsmetod för att studera neurobehavioral toxicitet hos en förening i zebrafisklarver

Overview

Denna artikel beskriver zebrafisk beteendemässiga svar på giftiga föreningar genom övervakning larv rörelse. Protokollet tittar vidare på ett exempel på zebrafisklarvernas svar på miljöföroreningsmedlet.

Protocol

1. Förberedelse för beteendetestet

1. Överför 800 μL exponeringslösning till varje brunn på 48 brunnsmikroplattan.
   OBS: Använd 16 brunnar för varje grupp (dvs. styrlösningen, 5 μg/L och 50 μg/L-grupp).
2. Använd en 1 ml pipettspets för att överföra 200 μL exponeringslösning med en larva från petriskålen i glas till en brunn på 48 brunnsmikroplattan.
3. Överför 4 ml exponeringslösning till varje brunn i mikroplattan på 6 brunnar.
   OBS: Använd en 6 brunns microplate för varje grupp.
4. Använd en 1 ml pipettspets för att överföra 200 μL exponeringslösning med två larver i varje brunn på 6 brunnsmikroplattan.
   OBS: Varje grupp har sex upprepande grupper.
5. Kontrollera att provningsrummets temperatur är 28 °C 2 timmar före provningen.
   OBS: Beteendetester utförs vanligtvis på eftermiddagen.

2. Rörelse- och banvinkeltest

1. Spara protokollet och sn vida testrummets ljus.
2. Acklimatisera larverna i systemet i 10 minuter och klicka på knappen "Experiment" "Kör" i tur och ordning, välj sedan mappen där experimentfilerna sparas och ange resultatnamnet.
3. Klicka på knappen "Bakgrund" "Start" i tur och ordning för att starta testet.
4. Klicka på knappen" Experiment" "Stop" i sin tur för att stoppa experimentet när testet avslutas.
   OBS: Systemet visar de data som testas när systemet stannar. Data inkluderar det spårade avståndet vid tre hastighetsklasser och banvinkelnummer vid åtta vinkelklasser per minut. För rörelsetestet i det presenterade exemplet beräknas det totala avståndet i varje ljusperiod (10 min) och skillnaden mellan kontrollgruppen och behandlingsgrupperna jämförs.
5. Överför 48 brunns microplate tillbaka till ljusinkubatorn för andra experiment.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
48-well-microplate	Corning	3548	Embyros housing
6-well-microplate	Corning	3471	Embyros housing
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	Behavior instrument
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	Behavior software
Pipette	Eppendorf	3120000267	Transfer solution