Analyse de membrane de sous-sol de culture 3D : Culturing Cellules cancéreuses sur la matrice de protéine de membrane de sous-sol 3D pour étudier l’invasion cellulaire

Abstract

Source : Cvetković, D., et autres. Quantification de l’invasivité cellulaire du cancer du sein à l’aide d’un modèle tridimensionnel (3D). J. Vis. Exp. (2014).

Cette vidéo fournit une méthodologie détaillée pour cultiver les cellules cancéreuses du sein dans une matrice de protéines membranaires 3D sous-sol, ilplifiant le potentiel de la culture 3D dans l’évaluation de l’invasion cellulaire dans l’environnement environnant.

Protocol

1. Culture tridimensionnelle des cellules cancéreuses du sein dans la matrice membranaire du sous-sol (La technique d’intégration) Manipulation de la matrice membranaire du sous-sol Matrigel : Décongeler sur la glace pendant la nuit à 4 °C. La matrice membranaire du sous-sol est liquide à basse température, mais se solidifie à température ambiante. Gardez la matrice membranaire dusous-sol sur la glace ( Figures 1A-B). Couvrez le plat confocal no 1 à fond …

Representative Results

Figure 1. Culture tridimensionnelle des cellules cancéreuses du sein MDA-MB-231 dans la matrice membranaire du sous-sol (la technique d’intégration). A-B) Un schéma de la configuration expérimentale (effectuée dans le capot de fumée). C) Le puits du plat à fond de verre recouvert de 50 μl de matrice membranaire du sous-sol. D) Plat(es) placé dans un incubateur de culture cellulaire (à 37 °C avec 5% de CO2) po…

Materials

35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes	MatTek Corporation	P35G-1.0-14-C	Precooled before use
Bovine serum albumin (BSA)	BioShop	ALB003.100	Used at 3% for IF
1.5 ml tubes	VWR	CA10011-700	CA10011-700
100-mm culture dish BD353003	VWR	CABD353003	Sterile, disposable
15 ml Falcon tube	VWR	CA21008-918	Sterile, disposable
1 ml filtered tips	VWR	10011-350	Sterile, disposable
200 μl filtered tips	VWR	22234-016	Sterile, disposable
20 μl filtered tips	VWR	22234-008	Sterile, disposable
Fetal bovine serum (FBS)	Sigma	F1051	Used at 10% (v/v)
RPMI 1640 Medium with Glutamine	Life Technologies	11875-119	Used for culturing of MDA-MB-231 cells
MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136)	Lonza	CC-3150	Used for culturing of MCF10A cells
Olympus IX-81 microscope	Olympus		Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)