Test della membrana basale della coltura 3D: coltivare le cellule tumorali sulla matrice proteica della membrana basale 3D per studiare l'invasione cellulare

Abstract

Fonte: Cvetković, D., et al. Quantificazione dell’invasività cellulare del cancro al seno utilizzando un modello tridimensionale (3D). J. Vis. Exp.

Questo video fornisce una metodologia dettagliata per far crescere le cellule tumorali del seno in una matrice proteica della membrana basale 3D, esemplificando il potenziale della coltura 3D nella valutazione dell’invasione cellulare nell’ambiente circostante.

Protocol

1. Coltura tridimensionale delle cellule tumorali del seno nella matrice della membrana basale (la tecnica di incorporamento) Manipolazione della matrice della membrana basale Matrigel: Disgelo sul ghiaccio durante la notte a 4 °C. La matrice della membrana basale è liquida a bassa temperatura ma si solidifica a temperatura ambiente. Mantenere la matrice della membrana basale sulghiaccio (figure 1A-B). Coprire il piatto confocale n. 1 con fondo di vetro con 50 μl …

Representative Results

Figura 1. Coltura tridimensionale delle cellule tumorali mammali MDA-MB-231 nella matrice della membrana basale (la tecnica di incorporamento). A-B) Schema della configurazione sperimentale (eseguita nella cappa dei fumi). C) Il pozzo del piatto con fondo di vetro rivestito con 50 μl di matrice a membrana basale. D) Piatti collocati in un incubatore di coltura cellulare (a 37 °C con 5% di CO2) per consentire alla matric…

Materials

35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes	MatTek Corporation	P35G-1.0-14-C	Precooled before use
Bovine serum albumin (BSA)	BioShop	ALB003.100	Used at 3% for IF
1.5 ml tubes	VWR	CA10011-700	CA10011-700
100-mm culture dish BD353003	VWR	CABD353003	Sterile, disposable
15 ml Falcon tube	VWR	CA21008-918	Sterile, disposable
1 ml filtered tips	VWR	10011-350	Sterile, disposable
200 μl filtered tips	VWR	22234-016	Sterile, disposable
20 μl filtered tips	VWR	22234-008	Sterile, disposable
Fetal bovine serum (FBS)	Sigma	F1051	Used at 10% (v/v)
RPMI 1640 Medium with Glutamine	Life Technologies	11875-119	Used for culturing of MDA-MB-231 cells
MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136)	Lonza	CC-3150	Used for culturing of MCF10A cells
Olympus IX-81 microscope	Olympus		Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)