Inducción transuretral de infección del tracto urinario ratón
Summary
Este video se muestran los métodos para inducir transuretral infecciones del tracto urinario ratón y cuantificar la extensión de las infecciones resultantes.
Abstract
Cepas bacterianas uropatógena de interés se cultivan en agar. En general, los uropatógenos<em> E. coli</em> (UPEC) y otras cepas pueden ser cultivadas durante la noche en Luria-Bertani (LB) de agar a 37 ° C en el aire ambiente. Cepas UPEC crecer como colonias de color blanco amarillento translúcido en LB agar. Tras la confirmación de la morfología de las colonias apropiadas, las colonias solo entonces se escogió para ser cultivadas en caldo. Caldo de LB se pueden utilizar para la mayoría de cepas bacterianas uropatógenos. Dos culturas de serie, la noche de caldo de LB se pueden emplear para aumentar la expresión de pili de tipo I, un factor de virulencia bien definidas para las bacterias uropatógenos. Caldos de cultivo se diluye a la concentración deseada en tampón fosfato salino (PBS). De ocho a 12 semanas de edad ratones hembra se colocan bajo anestesia con isoflurano y transuretral inoculadas con las bacterias mediante tubos de polietileno cubiertas de 30 jeringas de calibre. Inóculos típico, el cual debe ser determinada empíricamente para cada combinación de cepas bacterianas / ratón, son 10<sup> 6</sup> A 10<sup> 8</sup> UFC por ratón de 10 a 50 microlitros de PBS. Tras el periodo de infección deseado (un día a varias semanas), las muestras de orina y la vejiga y los riñones tanto se cosechan. Cada órgano es picado, colocado en PBS, y se homogeneizaron en un homogeneizador Bala Azul. Homogeneizados de orina y el tejido se diluyen en serie en PBS y se cultivaron en agar apropiado. Al día siguiente, las unidades formadoras de colonias se cuentan.
Protocol
Discussion
La inducción de la infección del tracto urinario del ratón mediante la inoculación de bacterias transuretral es un procedimiento de larga data, pero técnicamente exigente 11. Colgado y Hultgren ha publicado recientemente una excelente revisión de las técnicas transuretral de infección del tracto urinario del ratón 13. En este trabajo, se intenta ilustrar los puntos más importantes de este enfoque experimental.
Los principiantes pueden practicar su técnica med…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer a Shelly Xie y Jennifer Payne por su asistencia técnica de expertos. Este trabajo fue posible gracias a donaciones de la Sociedad de Urología Pediátrica y el Fondo de Stanford Pediatric Research.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps) | E&K Scientific | 640201 | ||
| Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring | E&K Scientific | 440011-N | ||
| Bullet Blender | Next Advance | BBX24 | ||
| Zirconium Oxide Beads (0.5mm) | Next Advance | ZROB05 | ||
| Stainless Steel Beads (1.6mm) | Next Advance | SSB16 | ||
| Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm) | Next Advance | SSB14B | ||
| CBA/J Mice, 8-12 week old female | Jackson Laboratories | 000656 | ||
| Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM) | EMD | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | ||
| LB agar | ||||
| LB broth | EMD | 1.10285.0500 | ||
| Isoflurane (Aerrane) | Baxter | NDC 10019-773-60 | ||
| Inoculating loops | Fisher Scientific | 22-363-601 | ||
| Eosin-methylene blue (EMB) agar powder | Himedia Laboratories | MM022-500G | ||
| MacConkey agar powder | Difco | 212123 | ||
| LB agar powder | Difco | 244520 | ||
| Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)] | BD Biosciences | 427401 | ||
| 30 gauge needles, 1/2 inch | BD Biosciences | 305106 | ||
| 1 ml tuberculin Slip-Tip syringe | BD Biosciences | 309602 | ||
| 3 ml Luer-Lock syringe | BD Biosciences | 309585 |
References
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