جبلة المحوار من عزل العصب الوركي الجرذ
Summary
نظهر بروتوكول للعزلة جبلة المحوار من العصب الوركي الجرذان الكبار على أساس تشريح الأعصاب وكراسات الحضانة في المتوسط للإفراج ناقص التوتر وليز الميلين غير محواري الهياكل ، تليها استخراج المواد محوار التخصيب المتبقية.
Abstract
بمعزل عن السيتوبلازم محواري النقي (جبلة المحوار) من الأعصاب الطرفية أمر حاسم للدراسات الحيوية في العديد من العمليات البيولوجية. في هذه المقالة ، علينا أن نظهر ووصف بروتوكول للعزلة جبلة المحوار من العصب الوركي الجرذان الكبار على أساس الخطوات التالية : (1) تشريح الأعصاب والكراسات فصل النسيج الضام ، (2) حضانة شرائح قصيرة من الكراسات في العصب المتوسط ناقص التوتر الافراج الميلين وليز غير محواري الهياكل ، و (3) استخراج المواد محوار التخصيب المتبقية. أكدت توصيف البروتين والبيوكيميائية هذا المستحضر على درجة عالية من التخصيب لمكونات المحاور.
Protocol
Discussion
وقد أكدت التحاليل البيوكيميائية والبروتين أن هذا الإجراء يقلل من تلوث الدم والخلايا الدبقية 3 بالمقارنة مع الأساليب المذكورة سابقا لعزل جبلة المحوار بواسطة الضغط الميكانيكي 1. وقد استخدمنا هذا البروتوكول العزلة جبلة المحوار لاستكشاف داينين المستندة…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
- Male Wistar rats (8-10 weeks old)
- PBS 0.2X and PBS 1X solutions containing protease inhibitors (Roshe) 2 tablets per 50 ml
- Eppendorfs for 1.5 ml
- Sterilized plastic dishes 35 mm
- Dissecting tools including: scissors and fine forceps
- Binocular and table light
Antibodies
Mouse anti-GFAP clone G-A-5 was from Sigma (G6171). Rabbit anti-Albumin was from Cedarlane (CLAG5140). Mouse anti-Tubulin β3 and rabbit anti-gERK were from Sigma (T2200 and M5670 respectively).
References
- Hanz, S., Perlson, E., Willis, D., Zheng, J. Q., Massarwa, R., Huerta, J. J., Koltzenburg, M., Kohler, M., van-Minnen, J., Twiss, J. L. Axoplasmic importins enable retrograde injury signaling in lesioned nerve. Neuron. 40, 1095-1104 (2003).
- Michaelevski, I., Medzihradszky, K. F., Lynn, A., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. Axonal transport proteomics reveals mobilization of translation machinery to the lesion site in injured sciatic nerve. Mol Cell Proteomics. 9 (5), 976-987 (2010).
- Rishal, I., Michaelevski, I., Rozenbaum, M., Shinder, V., Medzihradszky, K. F., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. Axoplasm isolation from peripheral nerve. Dev Neurobiol. 70, 126-133 (2010).
- Twiss, J. L., Fainzilber, M. Ribosomes in axons–scrounging from the neighbors. Trends Cell Biol. 19, 236-243 (2009).
