Biz gramicidin kanal aktivitesinin bir ölçüsü olarak floresan su verme hızı monitörleri hızlı bir floresan bazlı analiz tanıtmak. Gramicidin kanalları, çift katlı kapsayan proteinler tarafından algılanan, çift katlı lipid özellikleri değişiklikleri izlemek için moleküler kuvvet dönüştürücüler olarak kullanılır.
Biyolojik bir işlevi modüle etmek için kullanılan birçok ilaç ve diğer küçük moleküller bilayeri / çözüm arayüzü ve böylece adsorbe çift katlı lipid özelliklerini değiştirebilir amfifiler. Membran proteinlerin hidrofobik etkileşimler enerjik ev sahibi bilayeri birleştiğinde, çünkü bu önemlidir. Çift katlı özelliklerinde değişiklikler dolayısıyla protein fonksiyonu ve "off-hedef" ilaç etkileri için olası bir mekanizma modüle amfifiler için dolaylı bir yol sağlar membran protein fonksiyonu, değiştirirler. Daha önce 3,12 probları gibi lineer gramicidin kanallarını kullanarak, çift katlı lipid özellikleri değişiklikleri saptamak için bir elektrofizyolojik tahlil geliştirdik . Gramicidin kanalları transbilayer dimerization iletken olmayan iki alt birimden oluşan mini-proteinleri. Onlar, çift katlı lipid özellikleri izleme değişiklikler için güçlü probları bilayeri kapsayan proteinler tarafından algılanan yapar membran çevre, değişimlere duyarlıdır. Şimdi probları aynı kanallarını kullanarak çift katlı özelliklerinde değişiklik tespit için bir floresan tahlil göstermektedir. Tahlil gramicidin kanallar aracılığıyla quencher giriş nedeniyle fluorofor yüklü büyük unilamellar veziküller floresan su verme zamanı ders ölçme dayanmaktadır. Biz floresan göstergesi / söndürücü çifti 8-aminonaphthalene-1 ,3,6-trisulfonate (KARINCALARIN) / Tl + diğer floresan su verme deneyleri 5,13 başarıyla kullanılmaktadır. Tl + yavaş yavaş 8 çift katlı lipid nüfuz ama gramicidin kanallar 1,14 yürütülmesi yoluyla kolayca geçer. Bu yöntem, mekanistik çalışmalar ve bilayeri rahatsızlık vermesini, ve potansiyel "off-hedef", efektler için küçük moleküllerin yüksek verimli tarama için ölçeklenebilir ve uygun. Biz bu yöntemi kullanarak sonuçları önceki elektrofizyolojik sonuçları 12 ile iyi bir anlaşma olduğunu bulabilirsiniz.
Biz, ilaç ve diğer küçük amfifiler bilayeri değiştirme potansiyeli belirlemek için hızlı bir floresan bazlı analiz göstermiştir. Bilayeri özelliklerini değiştirmek Bileşikler nonspesifik dolaylı bir şekilde membran protein işlevini değiştirmek için, muhtemelen "off-hedef" ilaç etkileri katkıda muhtemeldir. Bilayeri kapsayan proteinler tarafından algılanan çift katlı özelliklerinde değişiklik 12 probları olarak tahlil gramicidin kanalları güç patlatır. Floresans t…
The authors have nothing to disclose.
Michael J. Bruno, Chianti Rusinova ve Jon T. Çuval birçok uyarıcı tartışmalar için teşekkür ederiz. NIH, R01GM021342 ve arra eki R01GM021342-35S1, ve OSA Josiah Macy, Jr. Vakfı'nın maddi destek; Üç HII için SPK programı ve Iris L. ve S. Leverett Woodworth Tıp Bilim Adamı Bursu ve NIH MSTP hibe RK için GM07739.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
ANTS | Invitrogen | A-350 | ||
gramicidin | Sigma Chemical Co | G-5002 | ||
1,2-dierucoyl-sn-glycero-3-phosphocholine | Avanti Polar Lipids | 850398C | ||
Mini-Extruder kit | Avanti Polar Lipids | 610000 | ||
PD-10 Desalting column | Sigma-Aldrich Made by GE Healthcare | 54805 |