Summary

نموذج مثلي من سرطان المبيض في الفئران مصلي مناعيا ل في الجسم الحي التصوير الورم ورصد الاستجابات المناعية ورم

Published: November 28, 2010
doi:

Summary

لدراسة<em> في الجسم الحي</em> نمو الورم ورم والمكروية ، استخدمنا نموذج الفأر مسانج ومثلي من سرطان المبيض في الحيوانات مناعيا. transduced نحن خلية الورم خط الماوس (MOV1) مع بروتين فلوري Katushka (MOV1<sup> كات</sup>) ، وهنا نعرض لها مثلي في زرع المبيض و<em> في الجسم الحي</em> التصوير.

Abstract

خلفية : عادة يتم تشخيص سرطان المبيض في مرحلة متقدمة حيث نسبة حالة / وفيات مرتفعة وهكذا يظل الأكثر فتكا من جميع سرطانات الجهاز التناسلي للمرأة بين النساء في الولايات المتحدة 1،2،3. الأورام المصلية هي الأشكال الأكثر انتشارا من سرطان المبيض وراثيا على 4،5 TG – MISIIR أبوغزاله يمثل نموذج الفأر الوحيد الذي يتطور بشكل عفوي هذا النوع من الأورام. TG – MISIIR أبوغزاله الفئران أعرب SV40 تحويل المنطقة الخاضعة لسيطرة العقاقير المثبطة مولر النوع الثاني من مستقبلات (MISIIR) مروج الجين 6. وقد تم تحديد خطوط إضافية المعدلة وراثيا التي تعبر عن العلامات SV40 والتحوير ، ولكن لا تطور أورام المبيض. ورم غير الفئران المعرضة للمعرض عمر نموذجية لC57Bl / 6 الفئران وخصبة. ويمكن استخدام هذه الفئران كمتلقين طعم خيفي مسانج للخلايا السرطانية المعزولة من TG – MISIIR – TAG – DR26 الفئران.

الهدف : على الرغم من التصوير الورم ممكن 7 ، الكشف المبكر عن الأورام العميقة الصعبة في الحيوانات الحية الصغيرة. لتمكين الدراسات قبل السريرية في نموذج حيواني سليمة مناعيا لسرطان المبيض المصلي ، وصفنا نموذج الفأر مسانج لهذا النوع من سرطان المبيض الذي يسمح التصوير في الجسم الحي ، ودراسات للالمكروية الورم ورم والاستجابات المناعية.

طرق : أولا نحن المستمدة TAG سرطان الماوس + خط الخلية (MOV1) من ورم المبيض العفوي المقطوع في الأسبوع 26 من العمر من العمر TG – MISIIR أبوغزاله DR26. ثم ، فإننا transduced ستابلي MOV1 الخلايا مع متجه الفيروسة البطيئة TurboFP635 الثدييات التي تكود Katushka ، متحولة بعيدة للبروتين أحمر فلوري في البحر الأحمر من Entacmaea quadricolor النعمان مع الإثارة / الانبعاثات في ماكسيما 588/635 8،9،10 نانومتر. نحن مزروع orthotopically MOV1 كات في المبيض 11،12،13،14 غير الورم الفئران TG – MISIIR أبوغزاله الإناث عرضة. وأعقب تطور الورم عن طريق التصوير الضوئي في الجسم الحي والمكروية الورم كان تحليلها من قبل المناعية.

المتقدمة مزروع Orthotopically MOV1 خلايا أورام المبيض كات مصلي : النتائج. يمكن MOV1 الأورام كات يمكن تصور من قبل في مجال التصوير فيفو تصل إلى ثلاثة أسابيع بعد الزرع (الشكل 1) وكانت مخترقة مع الكريات البيض ، كما لوحظ في سرطان المبيض الإنسان 15 (الشكل 2).

الاستنتاجات : نحن تصف نموذجا مثلي من سرطان المبيض مناسبة للتصوير في الجسم الحي من الأورام في وقت مبكر نظرا لارتفاع درجة الحموضة في المحافظة على استقرار وصمود للضوء من Katushka في الأنسجة العميقة. نقترح استخدام هذا النموذج مسانج رواية الاصابة بسرطان المبيض لمصلي في الدراسات المجراة التصوير ورصد الاستجابات المناعية الورم والمناعية.

Protocol

1. خلية ثقافة قبل الحقن مثلي ، والثقافة MOV1 خلايا كات ، والمستمدة من DR26 الأورام ، في قارورة T175 حتى انهم 90 ٪ متموجة. خطة لاستخدام 1-5000000 الخلايا في الحقن ، وهو ما سيتطلب 1 أو 2 T175 القوارير. في ?…

Discussion

الجراحة والحقن مثلي

حقن مثلي في جراب المبيض مطالب التدريب والدقة. وبالتالي

  1. في حالة سوء الممارسة الجراحية والخبرة مع الجثث الاولى.
  2. استخدام الإناث تفضيل…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من قبل منظمة العفو الدولية NIH P01 منح 068730 (SNC ، NS) ، ومنح CA016520 المعاهد الوطنية للصحة / TAPITMAT (NS) ، والتمويل من القطاع الخاص من مؤسسة Claneil (NS) ، والمبيض بوغ الإطارية بشأن تغير المناخ ، ومنحة لجامعة ولاية بنسلفانيا ( CA83638 P50) وفوكس تشيس للسرطان مركز الأساسية غرانت (P30 CA06927) (DCC). المؤلفان بالشكر إلى المساعدة التقنية الممتازة لمرفق كور البصرية / ضوء بارد من إخراج الدكتور EJ Delikatny في جامعة بنسلفانيا انتوني Secreto ، من الخلايا الجذعية الأساسية طعم أجنبي وإخراج G. Desnoyers – دانيه الدكتور في جامعة بنسلفانيا للسرطان مركز للتدريب لSNC تقنية الحقن مثلي وDangaj Denada في جامعة بنسلفانيا / OCRC للمساعدة في عملية جراحية.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM-GLUTAMAX   Invitrogen 10564-011  
PBS   Gibco 14040  
Versene   Lonza 17-711E  
Heating pad   Deltaphase 39 DP  
Povidone pads   Dynarex 1108  
Alcohol pads   Fisher 06-669-62  
Artificial tears ointment   Phoenix Pharma., Inc. 17845-153  
Ketoprofen   Fort Dodge laboratories    
3cc/insulin syringe   BD 309301  
Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm)   Syneture 9612-31  
Tissue adhesive   Vetbond 3M  
Vet Bactrim/ oral suspension   Hi-tech Pharmacal 840823  
IVIS-Lumina   Caliper lifesciences    
Isofluorane   Phoenix Pharma., Inc. J108013  
Fetal Bovine Serum, Qualified   Invitrogen 10437036  
Penicillin/streptomycin   Gibco 15140  
TurboFP635 mammalian vector   Evrogen FP721  
T175 flasks   cellstar 660-190  

References

  1. Etzioni, R., et al. The case for early detection. Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).
  2. Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet. Future Medicine. 3, 275-288 (2009).
  3. Anderson, G. L., et al. Assessing Lead Time of Selected Ovarian Cancer Biomarkers: A Nested Case Control Study. J Natl Cancer Inst. 102, 26-38 (2010).
  4. Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocr Rev 22. , 255-288 (2001).
  5. Dubeau, L. The cell of origin of ovarian epithelial tumours. Lancet Oncol. 9, 1191-1197 (2008).
  6. Connolly, D. C., et al. Female mice chimeric for expression of the simian virus 40 TAg under control of the MISIIR promoter develop epithelial ovarian cancer. Cancer Res. 63, 1389-1397 (2003).
  7. Hensley, H., et al. Magnetic resonance imaging for detection and determination of tumor volume in a genetically engineered mouse model of ovarian cancer. Cancer Biol Ther. 6, (2007).
  8. Deliolanis, N. C., et al. Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications. J Biomed Opt. 13, (2008).
  9. Hoffman, R. M. A better fluorescent protein for whole-body imaging. Trends Biotechnol. 26, (2008).
  10. Shcherbo, D., et al. far-red fluorescent protein for whole-body imaging. Nat Methods. 4, 741-746 (2007).
  11. Fu, X., Hoffman, R. M. Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens. Anticancer Res. 13, 283-286 (1993).
  12. Kiguchi, K., et al. A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer. Clinical & experimental metastasis 16. , 751-756 (1998).
  13. Bao, R., et al. Activation of cancer-specific gene expression by the survivin promoter. J Natl Cancer Inst. 94, 522-528 (2002).
  14. Connolly, D. C., Hensley, H. H. Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45. , 1-36 .
  15. Milne, K., et al. Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors. , (2009).

Play Video

Cite This Article
Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses. J. Vis. Exp. (45), e2146, doi:10.3791/2146 (2010).

View Video