Um modelo ortotópico de câncer de ovário seroso em camundongos imunocompetentes para In vivo Imaging Tumor e Monitoramento de Tumor respostas imunes
Summary
Para estudar<em> In vivo</em> Crescimento do tumor e microambiente do tumor, foi utilizado um modelo de camundongo e singênico ortotópico de câncer de ovário em animais imunocompetentes. Nós transduzidas um rato linhagem de células tumorais (MOV1) com Katushka proteína fluorescente (MOV1<sup> KAT</sup>) E aqui vamos mostrar a sua implantação ortotópico no ovário e<em> In vivo</em> Imagem.
Abstract
Antecedentes: O câncer de ovário é geralmente diagnosticada em fase avançada, onde a relação caso / fatalidade é alta e assim continua a ser o mais letal de todas as neoplasias malignas ginecológicas entre os EUA as mulheres 1,2,3. Tumores serosos são as formas mais generalizadas de câncer de ovário e de 4,5 a transgênicos Tg-MISIIR-Tag representa o modelo do rato só que espontaneamente se desenvolve este tipo de tumores. Tg-MISIIR-Tag ratos expressar SV40 região transformando sob o controle do mülleriano Substância Inibidora tipo II Receptor (MISIIR) promotor do gene 6. Adicionais linhagens transgênicas foram identificadas que expressam o transgene TAG SV40, mas não desenvolvem tumores de ovário. Não-tumor ratos propensos apresentam vida útil típica de camundongos C57BL / 6 e são férteis. Estes ratos pode ser usado como destinatários aloenxerto singeneicos para células tumorais isoladas de Tg-MISIIR-Tag-DR26 camundongos.
Objetivo: Apesar de imagem do tumor é possível 7, a detecção precoce de tumores profundos é um desafio em animais vivos de pequeno porte. Para habilitar estudos pré-clínicos em modelos animais imunologicamente intacto para o câncer de ovário seroso, descrevemos um modelo de camundongo singeneicos para este tipo de câncer de ovário que permite in vivo de imagens, os estudos do microambiente do tumor e tumor respostas imunes.
Métodos: Nós primeiro derivou uma Tag + mouse linha de células de câncer (MOV1) a partir de um tumor de ovário espontâneas colhidas num 26 semanas de idade, do sexo feminino Tg-DR26 MISIIR-TAG. Então, nós estável transduzidas MOV1 células com TurboFP635 vector Lentivirus mamíferos que codifica Katushka, um mutante vermelho-distante da proteína fluorescente vermelha do mar anemone Entacmaea quadricolor com excitação / emissão em 588/635 nm maxima 8,9,10. Nós ortotopicamente implantado MOV1 Kat no ovário 11,12,13,14 de não-tumor propensas Tg-MISIIR-Tag feminino ratos. Progressão do tumor foi seguido por em imagens ópticas vivo e microambiente do tumor foi analisado por imunohistoquímica.
Resultados: ortotopicamente implantado MOV1 células Kat desenvolveram tumores de ovário seroso. Tumores MOV1 Kat pode ser visualizado por in vivo de imagens até três semanas após o implante (fig. 1) e foram infiltradas com leucócitos, como observado nos cânceres de ovário humano 15 (fig. 2).
Conclusões: Descrevemos um modelo ortotópico de câncer de ovário adequado para a imagem in vivo de tumores no início devido ao alto pH de estabilidade e fotoestabilidade de Katushka em tecidos profundos. Propomos o uso deste novo modelo singeneicos de câncer de ovário seroso para estudos de imagem in vivo e monitoramento de tumor respostas imunes e imunoterapias.
Protocol
Discussion
Cirurgia e injeções ortotópico
Injeção ortotópico em bursa ovariana demandas de treinamento e precisão. Assim
- Em caso de pobres cirúrgica experiência prática, com cadáveres em primeiro lugar.
- Use preferencialmente mulheres multíparas (um ou dois litros) como elas se desenvolvem ovários maiores ao longo do tempo que facilita a injeção e no aumento de sobrevida para comparar com as fêmeas nulíparas.
- Devido ao pequeno tamanho da bursa ovariana mou…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pela subvenção NIH P01 AI 068.730 (SNC, NS), o NIH conceder CA016520 / TAPITMAT (NS), o financiamento privado da Fundação Claneil (NS), eo de ovário SPORE conceder a FCCC e da Universidade da Pensilvânia ( P50 CA83638) ea Fox Chase Cancer Center Núcleo Grant (P30 CA06927) (DCC). Os autores agradecem o apoio técnico excelente da Facilidade núcleo óptico / Bioluminescência dirigido pelo Dr. EJ Delikatny da Universidade da Pensilvânia, Anthony Secreto da Célula-Tronco e Core Xenoenxerto dirigido pelo Dr. G. Danet-Desnoyers da Universidade da Pensilvânia Cancer centro de treinamento para SNC técnica de injeção ortotópico e Dangaj Denada da Universidade de Pennsylvania / OCRC para auxiliar na cirurgia.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
| PBS | Gibco | 14040 | ||
| Versene | Lonza | 17-711E | ||
| Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
| Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
| Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
| Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
| Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
| 3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
| Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
| Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
| Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
| IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
| Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
| Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
| T175 flasks | cellstar | 660-190 |
References
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