En Orthotopic Modell av serös äggstockscancer hos immunkompetenta möss In vivo Bildgivande och övervakning av tumör Immunsvar
Summary
Att studera<em> In vivo</em> Tumörtillväxt och tumörens mikromiljö använde vi en syngena och orthotopic musmodell av äggstockscancer hos immunkompetenta djur. Vi transduced en mus linje tumörcell (MOV1) med Katushka fluorescerande protein (MOV1<sup> KAT</sup>) Och här visar vi att orthotopic implantation i äggstocken och<em> In vivo</em> Avbildning.
Abstract
Bakgrund: Äggstockscancer är i allmänhet diagnostiseras i ett sent skede där ärendet / dödsfall ratio är hög och därmed fortfarande den mest dödliga av alla gynekologiska maligniteter bland amerikanska kvinnor 1,2,3. Serös tumörer är den mest utbredda formerna av äggstockscancer och 4,5 TG-MISIIR-Tag transgena representerar den enda musmodell som spontant utvecklar denna typ av tumörer. TG-MISIIR-Tag möss uttrycka SV40 förvandla regionen under kontroll av Mullerian inhibitorämnet typ II receptorantagonist (MISIIR) genen 6. Ytterligare transgena linjerna har identifierats som uttrycker SV40 Tag transgenen, men inte utvecklas äggstockarna tumörer. Icke-tumör benägen möss uppvisar typiska livslängden för C57BL / 6 möss och är fertila. Dessa möss kan användas som syngena transplantatavstötning mottagare för tumörceller isolerade från Tg-MISIIR-Tag-DR26 möss.
Mål: Även bildgivande är möjligt 7, är tidig upptäckt av djupa tumörer utmanande i små levande djur. För att möjliggöra prekliniska studier på ett immunologiskt intakt djurmodell för serös äggstockscancer, beskriver vi ett syngena musmodell för denna typ av äggstockscancer som tillåter in vivo imaging, studier av tumören mikromiljön och tumör immunsvar.
Metoder: Vi först härrör en tagg + mus linje cancercell (MOV1) från en spontan äggstockarna tumör skördats i ett 26 veckor gammalt DR26 Tg-MISIIR-Tag kvinna. Sedan transduced vi stabilt MOV1 celler med TurboFP635 lentivirus däggdjur vektor som kodar Katushka, ett långt rött mutant av de röda fluorescerande proteinet från havsanemon Entacmaea quadricolor med excitation / emission Maxima vid 588/635 nm 8,9,10. Vi inopererad orthotopically MOV1 Kat i äggstocken 11,12,13,14 av icke-tumör benägna Tg-MISIIR-Tag honmöss. Tumörprogression följdes av in vivo optisk avbildning och tumörens mikromiljö analyserades med immunohistokemi.
Resultat: Orthotopically inopererad MOV1 Kat celler utvecklas serös äggstockarna tumörer. MOV1 Kat tumörer kan visualiseras genom in vivo imaging upp till tre veckor efter implantation (bild 1) och var infiltrerade med leukocyter som observerats i mänskliga äggstockscancer 15 (Fig. 2).
Slutsatser: Vi beskriver en orthotopic modell av äggstockscancer passar in vivo avbildning av tidiga tumörer på grund av de höga pH-stabilitet och fotostabilitet av Katushka i djupa vävnader. Vi föreslår användning av denna roman syngena modell serös äggstockscancer för in vivo imaging studier och uppföljning av tumör immunsvar och immunterapi.
Protocol
Discussion
Kirurgi och Orthotopic injektioner
Orthotopic injektion i äggstockarna Bursa kräver utbildning och precision. Således
- I händelse av dålig kirurgisk erfarenhet, praxis med kadaver först.
- Använd företrädesvis multipara kvinnor (en eller två kullar) eftersom de utvecklar större äggstockar med tiden vilket underlättar injektion och öka överlevnaden att jämföra med unga djur utan avkomma honor.
- På grund av den begränsade storleken på musen äggst…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av NIH bidraget P01 AI 068.730 (SNC, NS), NIH bidraget CA016520 / TAPITMAT (NS), den privata finansiering från Claneil Stiftelsen (NS) och äggstockscancer SPORE bidraget till FCCC och University of Pennsylvania ( P50 CA83638) och Fox Chase Cancer Center Kärna Grant (P30 CA06927) (DCC). Författarna tackar utmärkt teknisk hjälp av den optiska / mareld Core Facility regisserad av Dr EJ Delikatny vid University of Pennsylvania, Anthony Secreto från stamceller och xenograft Kärna regisserad av Dr G. Danet-Desnoyers vid University of Pennsylvania Cancer Centrum för utbildning SNC att orthotopic injektionsteknik och Denada Dangaj vid University of Pennsylvania / OCRC för att hjälpa på kirurgi.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
| PBS | Gibco | 14040 | ||
| Versene | Lonza | 17-711E | ||
| Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
| Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
| Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
| Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
| Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
| 3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
| Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
| Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
| Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
| IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
| Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
| Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
| T175 flasks | cellstar | 660-190 |
References
- Etzioni, R., et al. The case for early detection. Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).
- Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet. Future Medicine. 3, 275-288 (2009).
- Anderson, G. L., et al. Assessing Lead Time of Selected Ovarian Cancer Biomarkers: A Nested Case Control Study. J Natl Cancer Inst. 102, 26-38 (2010).
- Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocr Rev 22. , 255-288 (2001).
- Dubeau, L. The cell of origin of ovarian epithelial tumours. Lancet Oncol. 9, 1191-1197 (2008).
- Connolly, D. C., et al. Female mice chimeric for expression of the simian virus 40 TAg under control of the MISIIR promoter develop epithelial ovarian cancer. Cancer Res. 63, 1389-1397 (2003).
- Hensley, H., et al. Magnetic resonance imaging for detection and determination of tumor volume in a genetically engineered mouse model of ovarian cancer. Cancer Biol Ther. 6, (2007).
- Deliolanis, N. C., et al. Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications. J Biomed Opt. 13, (2008).
- Hoffman, R. M. A better fluorescent protein for whole-body imaging. Trends Biotechnol. 26, (2008).
- Shcherbo, D., et al. far-red fluorescent protein for whole-body imaging. Nat Methods. 4, 741-746 (2007).
- Fu, X., Hoffman, R. M. Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens. Anticancer Res. 13, 283-286 (1993).
- Kiguchi, K., et al. A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer. Clinical & experimental metastasis 16. , 751-756 (1998).
- Bao, R., et al. Activation of cancer-specific gene expression by the survivin promoter. J Natl Cancer Inst. 94, 522-528 (2002).
- Connolly, D. C., Hensley, H. H. Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45. , 1-36 .
- Milne, K., et al. Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors. , (2009).
