Injectie van dsRNA in Vrouw A. aegypti Mosquitos

Summary

Omgekeerde genetische benaderingen hebben bewezen zeer nuttig voor het bepalen van welke genen de basis liggen van resistentie tegen pathogenen in vector muggen. Deze video protocol illustreert een methode die wordt gebruikt door de James lab dsRNA injecteren in vrouwelijke A. aegypti muggen die de dengue virus haven. De techniek voor het kalibreren van injectienaalden, het manipuleren van de injectie setup, en het injecteren van dsRNA in de thorax wordt geïllustreerd.

Abstract

Omgekeerde genetische benaderingen hebben bewezen zeer nuttig voor het bepalen van welke genen de basis liggen van resistentie tegen pathogenen in vector muggen. Deze video protocol illustreert een methode die wordt gebruikt door de James lab dsRNA injecteren in vrouwelijke A. aegypti muggen die de dengue virus haven. De techniek voor het kalibreren van injectienaalden, het manipuleren van de injectie setup, en het injecteren van dsRNA in de thorax wordt geïllustreerd.

Protocol

Maak micro-injectie naalden door te trekken glazen capillaire buizen. We maken gebruik van een naald trekker van Sutter Instrument CO, (Model P-2000). De naald trekker programma specificaties zijn: warmte: 275 fil: 3 vel: 37 del: 250 pul: 125 Plaats een bekend volume (bv. 1 pi) van water in de naalden en handmatig de schaal markeren met een fijne Sharpie. Het opzetten van een post-injectie beker voor de muggen. Eerste snede het uiterste puntje af van een 1000 ui p…