Injeção de dsRNA em Mosquitos Feminino A. aegypti

Summary

Reversa abordagens genéticas têm-se revelado extremamente útil para determinar quais genes de resistência a patógenos underly vetor em mosquitos. Este protocolo de vídeo ilustra um método utilizado pelo laboratório de James para injetar dsRNA em fêmeas de mosquitos A. aegypti, que abrigam o vírus da dengue. A técnica para a calibração de agulhas de injeção, manipulando a configuração da injeção, e injetando dsRNA no tórax é ilustrado.

Abstract

Reversa abordagens genéticas têm-se revelado extremamente útil para determinar quais genes de resistência a patógenos underly vetor em mosquitos. Este protocolo de vídeo ilustra um método utilizado pelo laboratório de James para injetar dsRNA em fêmeas de mosquitos A. aegypti, que abrigam o vírus da dengue. A técnica para a calibração de agulhas de injeção, manipulando a configuração da injeção, e injetando dsRNA no tórax é ilustrado.

Protocol

Faça agulhas microinjeção puxando tubos capilares de vidro. Usamos um extrator de agulhas de Sutter CO Instrumento, (modelo P-2000). A agulha especificações do programa extrator são: calor: 275 fil: 3 vel: 37 del: 250 pul: 125 Carregar um volume conhecido (por exemplo, 1 ml) de água nas agulhas e marcar manualmente a escala com um sharpie bem. Configurar um copo após a injecção para os mosquitos. Primeiro corte a ponta outmost fora de uma ponta da pipeta…