Injektion av dsRNA till Kvinna A. aegypti Mosquitos

Summary

Omvänd genetiska metoder har visat sig extremt användbart för att avgöra vilka gener som underliggande motstånd mot vektor patogener i myggor. Denna video protokoll illustrerar en metod som James labbet att injicera dsRNA i kvinnliga A. aegypti myggor, som hyser den denguefeber virus. Tekniken för kalibrering injektionsnålar, manipulera injektionen setup, och injicera dsRNA i bröstkorgen illustreras.

Abstract

Omvänd genetiska metoder har visat sig extremt användbart för att avgöra vilka gener som underliggande motstånd mot vektor patogener i myggor. Denna video protokoll illustrerar en metod som James labbet att injicera dsRNA i kvinnliga A. aegypti myggor, som hyser den denguefeber virus. Tekniken för kalibrering injektionsnålar, manipulera injektionen setup, och injicera dsRNA i bröstkorgen illustreras.

Protocol

Gör mikroinjektion nålar genom att dra glas kapillärrör. Vi använder en nål avdragare från Sutter Instrument CO (modell P-2000). Nålen avdragare Programmet specifikationer: värme: 275 fil: 3 vel: 37 del: 250 PUL: 125 Ladda en känd volym (t.ex. 1 l) vatten i barr och manuellt markera skala med en fin Sharpie. Sätt upp en efter injektion kopp för myggen. Först klippa yttersta spetsen av av ett 1000 l pipettspetsen. Sedan skär ett hål i sidan av en kop…