Visualização do Sistema Nervoso embrionárias no Whole-mount Drosophila Os embriões
Summary
Nós descrevemos o procedimento para preparar encenado<em> Drosophila</em> Embriões para a visualização do sistema nervoso embrionário durante a embriogênese.
Abstract
O embrião Drosophila é um sistema modelo atraente para investigar as bases celulares e moleculares do desenvolvimento neuronal. Aqui nós descrevemos o procedimento para a visualização de Drosophila sistema nervoso embrionário utilizando anticorpos para proteínas neuronal. Uma vez que todo o embrião nervoso periférico e sistema nervoso central estão bem caracterizados no nível de células individuais (Dambly-Chaudière et al, 1986;.. Bodmer et al, 1987;. Bodmer et al, 1989), qualquer aberrações para estes sistemas podem ser facilmente identificados através de anticorpos para diferentes proteínas neuronal. Os embriões em desenvolvimento são coletados em determinados momentos para garantir que os embriões estão em fase de desenvolvimento adequado para visualização. Após a coleta, as camadas externas do embrião, a membrana cório eo envelope vitelínico que envolve o embrião, são removidos antes da fixação. Embriões são então incubados com anticorpos neuronal e visualizados usando fluorescente etiquetado anticorpos secundários. Embriões em estágios 12-17 são visualizados para acessar o sistema nervoso embrionário. No estágio 12 a banda germe CNS começa encurtamento e por etapa 15, o padrão definitivo da comissura foi alcançado. Por estágio 17 os contratos do SNC e do SNP está totalmente desenvolvido (Campos-Ortega et al. 1985). Assim, mudanças no padrão do PNS e sistema nervoso central pode ser facilmente observado durante estes estágios de desenvolvimento.
Protocol
Discussion
O embrião Drosophila é um sistema poderoso para investigar as mudanças celulares e moleculares durante o desenvolvimento neuronal. Neste protocolo temos demonstrado como preparar embriões montar toda a imuno-histoquímica. Nós adaptamos este protocolo a partir do protocolo descrito no Carroll e Scott, 1985. Este protocolo também pode ser adaptado para testar outros anticorpos neuronal, mas a otimização de anticorpos deve ser feito. Além disso, defeitos de desenvolvimento do PNS embrionárias e sistema …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG é apoiado por fundos da Universidade Estadual de Nova York em Buffalo e de John R. Oishei Foundation.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 37% formaldehyde | Fisher | BP531-25 | ||
| CSP | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| HRP-FITC | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 323-095-021 | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 | ||
| Vectashield Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 |
References
- Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
- Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
- Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
- Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Developmental Biology. 113, 288-294 (1986).
