Summary

Визуализация Эмбриональные нервной системы в целом монтажа Drosophila Эмбрионы

Published: December 11, 2010
doi:

Summary

Мы описываем процедуру подготовки постановке<em> Drosophila</em> Эмбрионов для визуализации эмбриональной нервной системы в процессе эмбриогенеза.

Abstract

Эмбриона дрозофилы является привлекательной моделью системы для исследования клеточных и молекулярных основ нейронных развития. Здесь мы опишем процедуру визуализации дрозофилы эмбриональной нервной системы с помощью антител к нейронов белки. Поскольку вся эмбриональных периферической нервной и центральной нервной системы хорошо характеризуется на уровне отдельных клеток (Dambly-Chaudière и др., 1986;.. Бодмер и др., 1987;. Бодмер и др., 1989), любые аберрации эти системы могут легко идентифицировать с помощью антител к различным нейронов белки. Развивающихся эмбрионов собираются в определенное время для того, чтобы эмбрионы в надлежащем стадиях развития для визуализации. После сбора, внешние слои эмбриона, мембраны хориона и конверт желточной, которая окружает эмбрион, удаляются перед фиксацией. Эмбрионы затем инкубировали с антителами нейронов и визуализировать использованием флуоресцентно меченых вторичных антител. Эмбрионы на стадии 12-17 визуализируются для доступа к эмбриональной нервной системы. На этапе 12 группы ЦНС зародыш начинает сокращение и этап 15 окончательные структуры спайка была достигнута. По стадия 17 ЦНС контрактов и ПНС полностью разработан (Кампос-Ортеги и соавт. 1985). Таким образом, изменения в структуре ПНС и ЦНС легко можно наблюдать во время этих стадиях развития.

Protocol

1. Подготовка реагентов Подготовка буфера PEMFA использованием 100mM Трубы, 2мм EGTA и 1 мМ MgSO 4. Отрегулируйте рН буфера до 7,0. Буфера PEMFA является фильтр стерилизуют и хранят при 4 ° C. Подготовка PBT, добавляя 1 мл Тритон Х-100 до 100 мл 1x PBS (фосфатно-солевым буфером) (рН 7,0). Хранить п?…

Discussion

Эмбриона дрозофилы это мощная система для исследования клеточных и молекулярных изменений во время развития нейронов. В этом протоколе мы продемонстрировали, как подготовить целых зародышей крепление для иммуногистохимии. Мы адаптировали данный протокол от протокол, описанный …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

SG поддерживается за счет средств из государственного университета Нью-Йорка в Буффало и от Джона Р. Oishei Foundation.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
37% formaldehyde   Fisher BP531-25  
CSP   Developmental Studies Hybridoma Bank    
HRP-FITC   Jackson ImmunoResearch Laboratories 323-095-021  
Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG   Invitrogen A-11004  
Vectashield Mounting Medium   Vector Laboratories, Inc. H-1000  

References

  1. Bodmer, R., Barbel, S., Sheperd, S., Jack, J. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Transformation of sensory organs by mutations of the cut locus of D. melanogaster. Cell. 51, 293-307 (1987).
  2. Bodmer, R., Carretto, R., Jan, Y. N. Neurogenesis of the peripheral nervous system in Drosophila embryos: DNA replication patterns and cell lineages. Neuron. 3, 21-32 (1989).
  3. Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. . The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).
  4. Carroll, S. B., Scott, M. P. Localization of the fushi tarazu protein during Drosophila embryogenesis. Cell. 43, 47-57 (1985).
  5. Dambly-Chaudière, C., Ghysen, A., Jan, Y. N., Jan, L. Y. Muscle connections between imaginal discs in Drosophila. Developmental Biology. 113, 288-294 (1986).

Play Video

Cite This Article
Kaczynski, T. J., Gunawardena, S. Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos. J. Vis. Exp. (46), e2150, doi:10.3791/2150 (2010).

View Video