ثقافة بأكملها تقنية الجنين يسمح لنا الماوس الثقافة وأجنة الفئران<em> خارج الحي</em> حالة فترات محدودة خلال المقابلة الى مراحل midgestation. في هذا البروتوكول الفيديو ، ونظهر إجراءاتنا القياسية للثقافة الفئران الجنين كله بعد E12.5 باستخدام زجاجة الثقافة المدورة من نوع النظام.
وقد وضعت كلها الجنين الثقافة (WEC) في عام 1950 أسلوب جديد من قبل وزملائه ، وقدم طلبا للعلم الأحياء التطوري 1. على الرغم من تطور ونمو أجنة من الثدييات التي تعتمد بشكل حاسم على وظيفة المشيمة ، WEC تقنية تسمح لنا الماوس الثقافة وأجنة الفئران السابقين شرط المجراة خلال فترات محدودة الموافق المراحل الجنينية midgestation خلال اليوم (E) 6.5 في E12.5 الماوس أو E8.5 – E14.5 في الفئران 2 ، 3 ، 4. في WEC ، يمكننا مباشرة الهدف المنشود مجالات الاجنة باستخدام الشعيرات الدموية الدقيقة الزجاج لأنه لا يمكن التلاعب بها أجنة تحت المجهر. لذلك ، WEC القوارض هو تقنية مفيدة جدا عندما نريد دراسة العمليات التنموية الحيوية للأجنة الثدييات postimplanted. حتى الآن ، وقد تم تطوير عدة أنواع من النظم WEC 1. من بين هؤلاء ، زجاجة الثقافة المدورة من نوع النظام هو الأكثر شعبية ومناسبة على المدى الطويل ثقافة أجنة في midgestation ، أي بعد وE9.5 E11.5 في الفأر والجرذان ، على التوالي 1. في هذا البروتوكول الفيديو ، ونظهر بمستوى إجراءاتنا WEC الفئران بعد E12.5 باستخدام نموذج راق في النظام المدورة الأصلي ، الذي صممه كوكروفت جديدة و 5 و 6 ، وإدخال مختلف تطبيقات تقنية WEC للدراسات الإنمائية في الثدييات البيولوجيا.
هناك نوعان من الخطوات الحاسمة في WEC القوارض للنجاح. أولا ، ينبغي إجراء تشريح لا تكون دقيقة إلى الأجنة الضرر ، لا سيما الأوعية الدموية. ثانيا ، ينبغي أن يكون الإجراء في أسرع وقت ممكن لأن الاوكسجين والمغذيات لم تعد الموردة عبر المشيمة بعد العزلة من الرحم. هذا أمر بالغ ال?…
The authors have nothing to disclose.
نشكر السيد هاجيمي Ichijo النصائح لتسجيل الفيديو ومفيدة لتحرير الفيديو. ونحن نشكر أيضا Drs.Yuji Tsunekawa وYoshizaki Kaichi لمساعد النوع لتسجيل الفيديو. ويدعم هذا العمل KAKENHI على B والعلماء الشباب على العلوم الأولوية مناطق الدماغ الجزيئية من وزارة التربية في اليابان. نعترف دعم البرنامج العالمي لمجلس أوروبا "مركز البحوث الأساسية وبالحركة العالمية للعلوم الدماغ" من وزارة التربية واليابان للأبحاث الأساسية للعلوم والتكنولوجيا تطوري (كريست) من العلوم اليابانية وشركة التكنولوجيا اليابانية من علوم والتكنولوجيا وكالة (JST) .
Name | Type | Company | Catalog Number | Comment |
Setting up WEC | ||||
WEC system (10-0310) | Tool | Ikemoto Rika | 010-0310 | Another small model is also available. |
Silicon plug without a hole | Tool | Ikemoto Rika | 010-032-08 | |
Gas mixture cylinder | Tool | Nikko Sanso | – | Containing 95% oxygen & 5% carbon dioxide. Custom order. |
Gas regulator | Tool | Ono Seisakusho | WR-11 | |
0.22 μm filter Millex GS | Tool | Millipore | SLGS033SS | |
Anesthesia and isolation of the uterus | ||||
Large scissors | Tool | Napox | B-7H | |
Forceps | Tool | Napox | A-3-2 | |
Disposal Petri dish (90 mm x 15 mm) |
Tool | Iwaki | SH90-15 | Deep-type dish is the best for dissection. |
Isoflurane | Reagent | Abbott | B506 | For anesthesia |
Pentobarbital sodium | Reagent | Schering-Plough Animal Health | – | For anesthesia |
Tyrode’s saline | Reagent | – | – | According as the protocol in Ref. 2. Save at 4°C. |
Timed-pregnant Sprague-Dawley rat | Animal | Charles Rivers Laboratories Japan | – | |
Preparation of culture medium | ||||
Culture glass bottle | Tool | Ikemoto Rika | 010-032-05 | |
Disposal culture bottle | Tool | Ikemoto Rika | 010-032-06 | |
Silicon plug with hole | Tool | Ikemoto Rika | 010-032-07 | |
Aluminum foil | Tool | Any company | – | |
Autoclaving bag | Tool | Hogy | HM-26 | For culture bottles |
Autoclaving bag | Tool | Hogy | HM-14A | For silicon plugs |
0.45 μm filter Millex HA | Tool | Millipore | SLHA033SS | |
50 ml conical tube | Tool | Becton Dickinson | 352070 | |
100 ml beaker | Tool | Iwaki | TE-32 | |
Rat IC serum | Reagent | Charles Rivers Laboratories Japan | – | Refer to: Mr. Kunihiko Morisaki, TEL: +81-(0) 45-474-9336; FAX: +81-(0) 45-474-9340 |
D(+)-Glucose | Reagent | Wako | 041-00595 | |
Antibiotic-antimyotic liquid | Reagent | Gibco | 15240 | |
Dissection of embryos | ||||
Ophthalmic straight scissors | Tool | Napox | MB50-7 | For cutting the uterine wall |
Ophthalmic curved scissors | Tool | Napox | MB54-2 | For cutting the yolk sac |
Forceps #5 | Tool | Vigor | T6715 | |
Forceps #5F | Tool | Regine | T6819 | |
Glass pipette | Tool | – | – | Made by hand using Pasteur pipette. |
Autoclaving bag | Tool | Hogy | HM-4 | For glass pipettes |
Binocular microscope | Tool | Leica | Mz7s | |
Light | Tool | Leica | CLS 150XD | |
Oil stone | Tool | Uchida Yoko | 833-2000 | For sharpening of forceps |
Machine oil | Tool | Uchida Yoko | 835-0000 | For sharpening of forceps |