視神経切断：中枢神経系における成人ニューロンのアポトーシスのモデル
Summary
視神経切断は、成体中枢神経系の損傷の広く使用されているモデルです。軸索は完全に軸索切断後14日以内に死亡する（軸索切断）transectedされる網膜神経節細胞（RGCs）の90％。このモデルは、実験操作に簡単に従順し、再現性の高いです。
Abstract
網膜神経節細胞は（RGCs）視神経を経由して、網膜から脳にその出力を視覚情報CNSニューロンです。視神経は、全体RGC人口の軸索を切断、目と完全にtransected（axotomized）の軌道内でアクセスすることができます。視神経切断は、成体中枢神経系1-4のアポトーシス神経細胞死の再現可能なモデルです。眼の硝子体腔は眼内注射を介して実験操作を可能にして、網膜への薬物送達のためのカプセルとして機能するので、このモデルは特に魅力的です。硝子体液を介して化学物質の拡散は、彼らが全体のRGCの人口に基づいて行動することを保証します。また、RGCsが選択的に標的、上丘8に視神経5月7日または注入ベクトルのカットの最後に短い干渉RNA（siRNA）、プラスミド、またはウイルスベクターを適用することにより、トランスフェクションすることができる。これは、研究者は他のバイスタンダーの神経細胞または周囲のグリア細胞上で交絡の影響なく、所望の神経細胞集団のアポトーシスのメカニズムを研究することができます。追加の利点は、細胞の生存が傷害後定量することができる容易さと精度です。網膜は、平らな、層状組織であり、RGCsは最も内側の層、神経節細胞層に局在している。 RGCsの生存は、軸索切断の時に視神経の切断端に蛍光トレーサー（3％Fluorogold）を適用することによって、または上丘（RGCのターゲット）の1週間前にトレーサを注入することにより、時間の経過とともに追跡することができます。軸索切断。トレーサーは逆行全体RGC人口のラベル付け、搬送され。神経節細胞層が単分子層（細胞1個分の厚さ）であるため、RGC密度は立体学を必要とせずに、フラットマウント組織で定量することができる。視神経切断は14日postaxotomy 9月11日中に負傷したRGCsの90％のアポトーシス死につながる。 RGCのアポトーシスは、細胞死、細胞が急速に退化した後、3〜4日のpostaxotomyを遅延さにより時間経過特性を持っています。これは、アポトーシスに関与する経路に対して誘導実験操作のための時間ウィンドウを提供します。
Protocol
Discussion
そこにこの外科手術の多くのバリエーションがあり、このプロトコールのステップのいくつかは必要ありません。それは唯一の神経へのアクセスを得るために、視神経を覆う筋肉を撤回することが必要である。しかし、神経の周りは非常に限られた作業スペースにこの結果は、切除の重要な最終段階は、より困難になります。特定の状況では、外眼筋や涙腺のすべてが、このインスタンスで?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
PDKは、CIHRオペレーティング助成金（MOP 86523）によってサポートされています
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic Frame | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Rat Gas Mask | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Anesthesia System | VetEquip | 901806 | ||
| Isoflurane (PrAErrane) | Baxter Corp | DIN 02225875 | ||
| Surgical Microscope | WPI, Zeiss, Leica | |||
| Fluorogold -(Hydroxystilbamidine bis(methanesulfonate) | Sigma | 39286 | ||
| Gelfoam | Pharmacia & Upjohn | |||
| Tears Naturale P.M. | Alcon | |||
| Proviodine | Medline | MDS093945H | ||
| Vannas spring scissors | Fine Science Tools | 15000-00 | ||
| Fine tip Dumont forceps | Fine Science Tools | 11252-00 | ||
| Micro surgical hook | Fine Science Tools | 10062-12 | ||
| Eye dressing serrated forceps | Fine Science Tools | 11152-10 | ||
| Dumont #7b sharp curved serrated forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | ||
| Cauterizer | Fine Science Tools | 18010-00 |
References
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