مقدمة لمختبر دودة : من الديدان إلى التثقيف الطفرات
Summary
الكشف عن العيوب المظهرية مع المسوخ هو طريقة مباشرة لتحديد الجينات التي تعمل في عملية بيولوجية معينة. في هذه المادة ونحن تصف كيفية الديدان الثقافة الحية الحرة (على سبيل المثال ،<em> Pristionchus pacificus</em>) في المختبر وتظهر طريقتين الطفرات المختلفة ، EMS و TMP الأشعة فوق البنفسجية /.
Abstract
يصف هذا البروتوكول الإجراءات للحفاظ على الديدان الخيطية في المختبر وكيفية mutagenize عليها باستخدام طريقتين البديل : إيثيل سلفونات الميثان (EMS) و 4 "5 ، 8 trimethylpsoralen مقرونة الأشعة فوق البنفسجية (TMP / الأشعة فوق البنفسجية). الديدان الخيطية هي النظم البيولوجية قوية لدراسات علم الوراثة بسبب خطتهم بسيطة الجسم ونظام التزاوج ، والذي يتكون من المخنثين المصير التسميد والذكور التي يمكن أن تولد المئات من النسل للحيوان الواحد. تتم المحافظة على الديدان الخيطية في لوحات تحتوي على الحشيش. آغار من البكتيريا ويمكن نقلها بسهولة من لوحة إلى أخرى باستخدام الاختيار. EMS هو وكيل مؤلكل تستخدم عادة للحث على الطفرات والحذف نقطة صغيرة ، في حين TMP / الأشعة فوق البنفسجية يؤدي الى الحذف أساسا. اعتمادا على نوع من الديدان الخيطية المستخدمة ، وتركيزات EMS و TMP يجب أن تكون الأمثل. لعزل الطفرات المتنحية من الديدان الخيطية Pristionchus pacificus ، تم فحص الحيوانات بصريا للجيل F2 عن الظواهر. لتوضيح هذه الأساليب ، نحن mutagenized الديدان وبحثت عن غير منسقة (UNC) ، المسوخ (الهيئة) بدين وقصير (Dpy) والمحولات.
Protocol
Discussion
الطفرات هي تقنية تستخدم على نطاق واسع للدراسات الجينية في مختلف الكائنات النموذج التجريبي. وغالبا ما تستخدم لتحديد الطفرات التجارب وظيفة الجين 2. ويمكن استخدام الإجراءات الطفرات وصفها هنا ليس فقط لP. pacificus ، ولكن أيضا لجيم ايليجانس الخيطية وغيرها من ا?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل جبهة الخلاص الوطني منحة المعهد المصرفي # 0615996.
References
- Brenner, S. . Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. . Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. . WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. . J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. . Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. . Genes & development. 18 (10), 1198-1198 (2004).
- Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. . Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).
- Jorgensen, E. M., Mango, S. E. . Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).
