इल्ली लैब के लिए एक परिचय: संवर्धन कीड़े से mutagenesis
Summary
प्ररूपी दोष के साथ म्यूटेंट के लिए स्क्रीनिंग जीन है कि एक दिया जैविक प्रक्रिया में समारोह की पहचान करने के लिए एक सरल तरीका है. हम इस लेख में वर्णन कैसे संस्कृति मुक्त रहने वाले कीड़े (जैसे,<em> Pristionchus pacificus</em>) प्रयोगशाला में और दो अलग अलग mutagenesis के तरीकों, ईएमएस और TMP यूवी / दिखाएं.
Abstract
इस प्रोटोकॉल प्रक्रियाओं का वर्णन करने के लिए प्रयोगशाला में और कैसे उन्हें दो वैकल्पिक तरीकों का उपयोग कर mutagenize नेमाटोड बनाए रखने: एथिल मीथेन sulfonate (ईएमएस) और 4, 5 ', 8-trimethylpsoralen पराबैंगनी प्रकाश / tmp (यूवी) के साथ संयुक्त. नेमाटोड क्योंकि उनके शरीर सरल योजना और संभोग प्रणाली, जो स्वयं fertilizing hermaphrodites और पुरुषों है कि जानवर प्रति संतान के सैकड़ों उत्पन्न कर सकते हैं की रचना की है के शक्तिशाली आनुवांशिकी अध्ययन के लिए जैविक प्रणालियों रहे हैं. नेमाटोड अगर जीवाणुओं की एक लॉन युक्त प्लेटों में रखा जाता है और आसानी से एक थाली से एक लेने का उपयोग दूसरे करने के लिए स्थानांतरित कर सकते हैं. ईएमएस एक alkylating एजेंट आमतौर बिंदु म्यूटेशनों और छोटे विलोपन प्रेरित किया है, जबकि मुख्य रूप से / tmp यूवी विलोपन लाती है. निमेटोड की प्रजातियों में इस्तेमाल किया जा रहा है पर निर्भर करता है, ईएमएस और TMP सांद्रता के लिए अनुकूलित किया जाना होगा. निमेटोड Pristionchus pacificus के पीछे हटने का परिवर्तन को अलग करने के लिए, F2 पीढ़ी के पशुओं नेत्रहीन phenotypes के लिए जांच की गई. इन तरीकों का उदाहरण देकर स्पष्ट करने के लिए, हम कीड़े mutagenized और बेबुनियाद (UNC), (Dpy) गठीला और ट्रांसफार्मर म्यूटेंट (Tra) के लिए देखा.
Protocol
Discussion
Mutagenesis विभिन्न प्रयोगात्मक मॉडल जीवों में आनुवंशिक अध्ययन के लिए एक व्यापक रूप से कार्यरत तकनीक है. Mutagenesis प्रयोगों अक्सर समारोह के लिए एक 2 जीन की पहचान के लिए उपयोग किया जाता है. mutagenesis यहाँ वर्णित प्रक्…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को NSF अनुदान 0615996 # आइओबी द्वारा वित्त पोषित किया गया.
References
- Brenner, S. . Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. . Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. . WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. . J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. . Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. . Genes & development. 18 (10), 1198-1198 (2004).
- Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. . Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).
- Jorgensen, E. M., Mango, S. E. . Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).
