이 프로토콜은 효율적으로 병렬에서 설명 및 플라스미드 DNA의 정화를위한 비용 효율적인 대안입니다<em> E. 대장균</em> 문화. AcroPrep 사전 프로세스가 높은 바인딩 용량 DNA 바인딩 필터를 접시에 정화 다음 최적의 lysate의 명확 필터 플레이트와 함께 시작합니다.
우리는 prokaryotic 문화에서 시작하고 고순도 DNA로 끝나는, 96 플라스미드 준비를위한 AcroPrep 사전 필터 플레이트의 전체 과정을 설명합니다. 세균성 lysate 통관 및 DNA의 정화를위한 멀티 잘 여과에 따라이 방법은 플라스미드 준비를위한 능률적인 프로세스를 만듭니다. 실리카 기반의 미디어를 포함하는 필터 플레이트는 쉽게 진공 여과 또는 플라스미드 DNA가 감지할 수있을 정도의 수량을 항복하기 위해 원심 분리기에 의해 처리할 수 있습니다. 정량 분석은 정화 플라스미드 DNA가 1.97의 평균 OD 280분의 260 비율로 양질의 지속 결정. 전반적으로, 플라스미드 수율은 시퀀싱 및 복제와 같은 다운 스트림 응용 프로그램에 대한 더 순수한 DNA를 제공합니다. AcroPrep 사전 필터 번호판을 사용하는 이것은 능률적인 방법은, 수동 세미 자동 또는 완전 자동으로 처리 수 있습니다.
우리는 몇 가지 장점을 내실수 AcroPrep 사전 필터 플레이트의 손쉬운, 간소화된 프로토콜을 설명합니다. 수동 세미 자동, 또는 완전 자동 AcroPrep 사전 형식으로 처리하면이 방법은 최대 플라스미드 DNA의 수율을 제공합니다. lysate 통관 접시에 통합 prefilter도 샘플, 입자의를 포함 높은 수준의 일관성있는 여과를 제공합니다. 보다 빠르고 균일 최소한의 개최 – 최대 볼륨으로 접시에 걸쳐 여과 속도에 판 결과 잘 도형 및 아울렛 팁 기하학은 교차 오염의 우려없이 수신기 플레이트에 샘플을 직접 흐름을 제공합니다. 중요한 AcroPrep 사전 필터 플레이트의 DNA 결합 판의 높은 바인딩 용량 막은 높은 품질의 플라스미드 DNA의 최대 회복에 최적입니다.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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AcroPrep Advance Filter plate | PALL | PN 8175 (1 mL) or PN 8075 (350 μl) |
3 μm glass fiber 0.2 μm Supor® membrane for clarification | |
AcroPrep Advance Filter Plate | PALL | PN 8132 | for DNA Binding | |
Vacuum manifold | PALL | PN 5017 | ||
Vacuum pressure pump | PALL | PN 13157 |