Summary
Neste relatório, propomos uma nova aplicação de luz de cura dental para as resinas base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise em experimentos crônica. Este material permite a ligação directa ao crânio.
Abstract
Em experimentos de gravação crônica, auto-cura dental resinas acrílicas têm sido usados como uma base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise-. Uma vez que estes não acrílicos vínculo até o osso, parafusos têm sido usados como âncoras. No entanto, em pequenos animais experimentais como tentilhões ou mouse, seus crânios são muito frágeis e não podem realizar com sucesso as âncoras. Neste relatório, propomos uma nova aplicação de luz de cura dental para as resinas base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise em experimentos crônica. Este material permite a ligação directa ao crânio. Portanto, parafusos de âncora não são necessários e campo cirúrgico pode ser reduzido consideravelmente. Experiências passadas mostram que o efeito de ligação mantém mais de 2 meses. Janela de resina convencional de tempo, quando os materiais são maleáveis e viável é de alguns minutos. No entanto, a janela do tempo de trabalho para estes adesivos dentais é significativamente mais larga e ajustável.
Protocol
Etapa 1. Preparação de implantação da sonda
- Anestesia (não mostrado no vídeo)
Anestesiar cada ave com uma injeção de um interperitoneal ketamina (12,5 peso corporal mg / kg) ea mistura de xilazina (25 mg / kg) para produzir um nível constante de anestesia cirúrgica.
- Fix uma cabeça a um quadro estereotáxico
Use Xylocaine (TM) de geléia para reduzir as dores locais de pressão bares orelha '. A cabeça de pássaro é fixado em um aparelho estereotáxico consistindo de barras de ouvido e um suporte de bico que mantém a cabeça em um ângulo de 45 °. Durante a cirurgia estereotáxica para implantação, aquecer o corpo de ave por pad cirúrgica com controle térmico (temperatura = 34 ~ 36 ° C).
- Desinfectar área cirúrgica
Desinfectar o campo cirúrgico com isodine (TM) antes da cirurgia.
Etapa 2. Posicionamento estereotáxica
- Alinhamento ponto de referência
Alinhar sonda dummy (vidro micropipeta) para o Lambda (Y-ponto) e marca Y-ponto com a pipeta dye-cheia. Restantes Dextran-TMR do estudo tracer última foi usado no vídeo.
- Incisão da pele
Retire a pele e expor a superfície do crânio. Então, limpar a superfície do crânio com cotonetes.
- Posicionamento da cânula dummy (na direção horizontal)
Mover a cânula dummy para o site de destino (AP eixo e coordenação Lateral)
- Craniotomia pequena e incisão da dura-máter.
Use uma pinça fina para craniotomia e uma agulha de injeção fina (30 G) para incisões da dura-máter. Então, limpar a superfície do crânio.
- Posicionamento final (implantação) da cânula dummy
Localize a ponta da cânula guia em 0,30 mm acima da sonda de microdiálise destina-região de destino. Por fim, limpar a superfície do crânio de novo, porque uma superfície limpa e seca é necessária para a ligação difícil.
Etapa 3. Pré-tratamento da superfície craniana
(O procedimento semelhante para "restauração direta enchimento" do produto dental deve ser empregada.)
- Tratamento primário
- Mix líquido PRIMAR A com B em um prato.
- Aplique a mistura sobre a superfície do crânio com uma pequena escova.
- Deixe descansar por 30 segundos.
- Seco com fluxo de ar suave. (Não lavar.)
- Aplicação do agente de união
- Aplicar o agente de união na superfície do crânio com uma pequena escova.
- Aplicar um fluxo de ar suave. (Não lavar.)
- Luz cura por 20 segundos.
Etapa 4. Montagem de resina composta
- Montagem de resina com plugger planície
Se um plugger Plain não estiver disponível, uma espátula de micro-pode ser usado em seu lugar.
- Fotopolimerização
- Incremental de montagem
Incremental de montagem é recomendada para garantir a reação completa da resina.
Para a montagem incremental, aplicar agente de união antes de cada montagem.
- Moldar a resina composta e fotopolimerizador para endurecimento final.
- Final da cirurgia
Limpar a área cirúrgica, aplicar antibiótico (gentamicina pomada), e remover o animal da chama estereotáxica. Então, manter o animal em uma câmara de termo-controlada (temperatura = 33-35 ° C) para recuperação pós-anestésica.
Conforme mostrado no vídeo, nem qualquer comportamento anormal foi observado em nenhum dos animais no dia seguinte após a cirurgia.
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Discussion
Em comparação com a aplicação de resinas acrílicas convencionais auto cura, a técnica introduzida tem várias vantagens importantes:
1. Ligação direta:
Acrílica auto-cura pode ser conectado ao osso por um tempo mas não adere ao osso. Portanto, os parafusos de fixação são necessários para corrigir uma base de montagem (ver Figura 2a). Em contraste, a resina de cura pela luz pode vínculo até o osso diretamente de modo parafusos não são necessários (Figura 2B). Portanto, o tamanho da base de montagem pode ser reduzido consideravelmente. Além disso, as resinas de cura pela luz também adere a alguns metais, se você usou "primer metal" com ele. Esta característica da ligação a materiais variável permite uma ampla gama de aplicação.
A Figura 2 mostra uma implantação usando acrílicos auto convencionais de cura (em 2A) e um implante com luz resinas adesivas de cura (no 2B). Em 2A, o parafuso de âncora é utilizada para fixar a base de montagem. Em 2B, o tamanho da base de montagem pode ser reduzida consideravelmente devido ao fato de que a resina de cura pela luz aderem ao crânio e parafusos como não são necessários. 
Figura 2
2. Fácil de manusear:
Janela de resina convencional o tempo de processamento é relativamente curto, em poucos minutos. Ele tem uma alta fluidez e não é fácil de manusear à primeira vista. Entretanto, uma vez iniciados reação química, a reação é acelerada pelo calor exotérmica e resinas se tornam mais difíceis em pouco tempo. As janelas de tempo de processamento para resina de fotopolimerização são significativamente mais larga e ajustável. Basicamente, as resinas manter elasticidade constante desde o início até o momento em que é fotopolimerizado.
3. Reação não gera calor:
Ea reação de cura da resina autopolimerizável é exotérmica. Quando a base de montagem é de espessura, este calor acumula e pode danificar o tecido. Reação da resina de cura pela luz não gera calor eo material é biocompatível.
4. Feitas à mão luz LED:
Custo do material e equipamentos especiais, como unidade de luz pode ser um problema. Na Figura 3, apresentamos uma mão feita LED unidade de luz que não custa muito. Esta mão-made unidade de fotoativação podem ser usados como substitutos para a unidade comercial caro.
Figura 3A mostra um diagrama de circuito da unidade de luz. Figura 3B mostra três LEDs colados paralelos uns aos outros, e inserido no suporte de um marcador quadro branco. 
Figura 3 - Diagrama do circuito (em A) e fotografia (em B) de uma unidade hand-made de luz
Esta técnica é aplicável a implantes de eletrodos crônica ou sonda de microdiálise em outros animais de experimentação, tais como peixes, mouse, coelho, gato e macaco.
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Disclosures
Experimentos foram realizados em conformidade com as orientações para a experimentação animal do cérebro Science Institute, RIKEN (RIKEN-BSI) e animal do instituto comitê de ética aprovado.
Acknowledgments
Agradecemos aos nossos colegas em RIKEN-BSI para os seus apoios e conselhos gentilmente frutífera durante este trabalho. Eu gostaria de expressar minha sincera gratidão ao Professor Shigemi Mori, Professor G bor Juh sz, os drs. Kiyoji Matsuyama, Katalin AK kesi e rp d Dobolyi que me aconselhou a estudar o método de microdiálise durante o curso de pós-graduação na Universidade de Pós-Graduação de Estudos Avançados, Japão. Finalmente, agradecemos o Sr. Dr. Chris Sarnecky e Akitsugu Takasu para os seus apoios em gravação de vídeo.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Bengalese finches | Animal | Two adult male , Body weight: 14.2 g and 14.8 g | ||
| Microdialysis probe | Tool | EICOM | total weight of probe, guide cannula, cap nut and dental adhesive resin: 0.65 to 0.78 g. | |
| Light-cured dental adhesive resin system | Kuraray Medical Inc | +Light cured composite resin (CLEARFIL AP-X). +Dual-cure dental adhesive system with the self-etching primer and bonding agent (CLEARFIL Liner Bond IIΣ). | ||
| Surgical instruments | Stereotaxic frame, surgical microscope, thermal controlled surgical pad and thermal controlled recovery chamber. Plain plugger for handling composite resin. Microspatula or sharp curette to ablate periosteum and muscles.Injection syringe and needle (30G) for inducing anesthesia.Small scissors. Fine forceps for making small craniotomy. | |||
| Light-unit | Rolence Enterprise Inc | Ultra-Lite 500E | ||
| Microscope | Konan Medical | KOM300 | with C-mount adaptor | |
| 3- CCD camera | Tool | Hitachi | HV-D30 |
References
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- Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. Microdialysis in the Neuroscience. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).
- Oakley, B., Schafer, R. Experimental Neurobiology: A laboratory Manual. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).
- Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study. Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).
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