محطات التحميل العصب ذبابة الفاكهة مع مؤشرات الكالسيوم
Summary
الكالسيوم هو رسول في كل مكان في الجهاز العصبي ، وضرورية لتحريك الافراج العصبي والتغييرات في قوة متشابك. هنا نظهر تقنية لتحميل كا 2 + – المؤشرات في محطات العصب ذبابة الفاكهة. نظهر أيضا تصنيع أجهزة المطلوبة ، والتأكيد على النقاط الحرجة للنجاح في هذه التقنية.
Abstract
الكالسيوم يلعب أدوارا عدة في الجهاز العصبي ولكن لا شيء أكثر إثارة للإعجاب من حيث الزناد لاطلاق سراح العصبي ، ولا شيء أكثر عمقا من أن رسول ضروري ليونة متشابك التي تدعم التعلم والذاكرة لمزيد من توضيح الأسس الجزيئية للكا 2 + التي تعتمد على آليات متشابك ، لا بد من نموذج النظام على حد سواء ليونة وراثيا ويمكن الوصول إليها من الناحية الفسيولوجية. ذبابة الفاكهة السوداء البطن يوفر مثل هذا النموذج. في هذا النظام ، وراثيا ترميز الفلورسنت المؤشرات المتوفرة لكشف كا 2 + التغيرات في المحطات الطرفية العصبية. ومع ذلك ، فقد تقتصر هذه المؤشرات حساسية للكا 2 + وغالبا ما تظهر استجابة غير خطية. تتلاءم بشكل أفضل المؤشرات لقياس الفلورسنت الاصطناعية كا السريع 2 + التغييرات المرتبطة بالنشاط العصبية. هنا نظهر تقنية لتحميل ديكستران – مترافق الاصطناعية كا 2 + المؤشرات في محطات العصب يرقات ذبابة الفاكهة تعيش في. هناك تركيز خاص على تلك الجوانب من البروتوكول الأكثر أهمية لنجاح هذه التقنية ، مثل كيفية تجنب التصريف الكهرباء الساكنة على طول الأعصاب معزولة ، والحفاظ على الصحة من إعداد أثناء فترات تحميل طويلة ، وضمان بقاء محور عصبي من خلال توفير كا 2 + لتعزيز ختم النهايات محوار مقطوعة. انخفاض تقارب ديكستران – مترافق كا 2 + ، المؤشرات ، مثل fluo – 4 وrhod ، التي تتوفر تظهر إشارة إلى ارتفاع نسبة الضوضاء في حين تعطيل الحد الأدنى من الكالسيوم قبل المشبكي 2 + الديناميات. ديكستران – اقتران يساعد على منع كا 2 + يجري عزلها المؤشرات في عضيات مثل الميتوكوندريا. ويمكن تطبيق هذه التقنية على حد سواء لتحميل الأجنة واليرقات والبالغين.
Protocol
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Schneider’s Insect Medium | Reagent | Sigma | S0146 | must contain L-glutamine and calcium |
| L-glutamic acid monosodium salt hydrate | Reagent | Sigma | G1626 |
References
- Macleod, G. T., Hegstrom-Wojtowicz, M., Charlton, M. P., Atwood, H. L. Fast calcium signals in Drosophila motor neuron terminals. J. Neurophysiol. 88, 2659-2663 (2002).
- Macleod, G. T., Suster, M. L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. Single neuron activity in the Drosophila larval CNS detected with calcium indicators. J. Neurosci. Methods. 127, 167-178 (2003).
- Macleod, G. T., Marin, L., Charlton, M. P., Atwood, H. L. Synaptic vesicles: test for a role in presynaptic calcium regulation. J. Neurosci. 24, 2496-2505 (2004).
- Reiff, D. F., Thiel, P. R., Schuster, C. M. Differential regulation of active zone density during long-term strengthening of Drosophila neuromuscular junctions. J. Neurosci. 22, 9399-9409 (2002).
- Reiff, D. F., Ihring, A., Guerrero, G., Isacoff, E. Y., Joesch, M., Nakai, J., Borst, A. In vivo performance of genetically encoded indicators of neural activity in flies. J. Neurosci. 25, 4766-4778 (2005).
