칼슘 지표로 로딩 Drosophila 신경 터미널

Summary

칼슘은 시냅스 강도 신경 전달 물질 릴리스 및 변경 실행을위한 필수적인 신경 시스템에 유비 쿼터스 메신저입니다. 여기 ⁺ – 지표 Drosophila 신경 터미널에 ^{칼슘이 로딩을위한} 기술을 보여줍니다. 우리는 또한 필요한 장치의 제조를 설명하고 기술의 성공을위한 중요한 포인트를 강조.

Abstract

칼슘은 신경 계통에 많은 역할을 담당하고 있지만 신경 전달 물질 릴리스에 대한 트리거로보다 인상하고, 학습 및 메모리를 지원하는 시냅스 소성에 필수적인 메신저로서보다 그리하여 더 깊이 없음. 추가로 칼슘 ^2의 분자 토대를 명료하게하다하려면 ⁺ 종속적인 시냅스 메커니즘, 모델 시스템은 유전자 가단과 생리학에 액세스할 모두되어 있어야합니다. Drosophila melanogaster 같은 모델을 제공합니다. 이 시스템에서 유전자 인코딩 형광 표시기 신경 터미널에서 칼슘 ^{2 +} 변화를 감지할 수 있습니다. 그러나 이러한 지표 칼슘 ² 민감성을 제한 ⁺ 종종 비선형 응답을 보여줍니다. 합성 형광 표시기가 더 빠른 칼슘 ^{2 +} 신경 활동과 관련된 변화를 측정에 적합합니다. 여기 Drosophila의 유충에 살고 신경 터미널에 dextran – 복합 합성 칼슘 ^{2 +} 지표를로드하는 방법을 보여줍니다. 특정 강조 그러한 연장 로딩 기간 동안 준비의 건강을 유지, 절연 신경을 따라 정전기의 방전을 방지하는 방법으로 기술의 성공에 가장 중요한 프로토콜의 이러한 측면에 배치하고, 칼슘 ² 제공하여 축삭의 생존을 보장합니다 ⁺ 절단 축삭의 엔딩의 씰링 추진. 낮은 친화력은 dextran – 복합 등 fluo – 4 및로드 '로 ⁺ – 지표, 칼슘 ^{2 +} 최소한 역학 presynaptic 칼슘 ² 방해하면서 높은 신호 대 잡음 비율을 보여주 어떤 사용할 수 있습니다. Dextran – 활용은 ⁺ 표시가 같은 mitochondria로 organelles로 압수되는 칼슘 ² 방지할 수 있습니다. 로딩 기법은 애벌레, 배아와 성인을 동등하게 적용할 수 있습니다.

Protocol

어떤 fixatives에 노출되지 않은 깨끗한 절개 요리를 선택합니다. 칼슘 2 포함 슈나이더의 Drosophila 매체에서 방황 제 3 instar Drosophila의 유충을 해부하다 +와 L – 글루타민 (모든 신경 손상이나 근육 섬유 Nos. 7, 6, 13 또는 12 깎지 않아.) 12 마이크론 팁 (내경)과 유리 필링 – 피펫을 선택합니다. 주사기와 튜브를 사용하면 (피펫에 부정적인 압력…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Schneider’s Insect Medium	Reagent	Sigma	S0146	must contain L-glutamine and calcium
L-glutamic acid monosodium salt hydrate	Reagent	Sigma	G1626