कैल्शियम संकेतक के साथ लोड हो रहा है ड्रोसोफिला तंत्रिका टर्मिनल
Summary
कैल्शियम तंत्रिका तंत्र में एक सर्वव्यापी दूत, synaptic शक्ति में neurotransmitter रिहाई और परिवर्तन को ट्रिगर करने के लिए आवश्यक है. यहाँ हम ड्रोसोफिला तंत्रिका टर्मिनलों में + संकेतक 2 Ca लोड करने के लिए एक तकनीक का प्रदर्शन . हम भी आवश्यक तंत्र के निर्माण का प्रदर्शन और है तकनीक की सफलता के लिए महत्वपूर्ण बिंदुओं पर जोर.
Abstract
कैल्शियम तंत्रिका तंत्र में कई भूमिका निभाता है लेकिन कोई भी neurotransmitter रिहाई के लिए ट्रिगर के रूप में की तुलना में अधिक प्रभावशाली है, और कोई भी synaptic plasticity है कि सीखने और स्मृति का समर्थन करता है के लिए आवश्यक दूत के रूप में की तुलना में अधिक गहरा है. आगे Ca 2 के आणविक आधार स्पष्ट + निर्भर synaptic तंत्र, एक मॉडल प्रणाली की आवश्यकता है कि दोनों आनुवंशिक निंदनीय और physiologically से सुलभ है. ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर इस तरह के एक मॉडल उपलब्ध कराता है. इस प्रणाली में, अनुवांशिक इनकोडिंग फ्लोरोसेंट संकेतक तंत्रिका टर्मिनलों में Ca 2 + परिवर्तन का पता लगाने के लिए उपलब्ध हैं. हालांकि, इन संकेतकों 2 Ca के लिए संवेदनशीलता सीमित है + और अक्सर एक गैर रेखीय प्रतिक्रिया दिखा. सिंथेटिक फ्लोरोसेंट संकेतक बेहतर तेजी Ca 2 + तंत्रिका गतिविधि के साथ जुड़े परिवर्तन को मापने के लिए उपयुक्त हैं. यहाँ हम ड्रोसोफिला लार्वा में रहते तंत्रिका टर्मिनलों में dextran संयुग्मित सिंथेटिक Ca 2 + संकेतक लोड करने के लिए एक तकनीक का प्रदर्शन . सबसे पृथक नसों के साथ स्थैतिक बिजली निर्वहन कैसे से बचने के लिए, विस्तारित लोड हो रहा है अवधि के दौरान की तैयारी के स्वास्थ्य को बनाए रखने के जैसे है तकनीक की सफलता के लिए महत्वपूर्ण है, प्रोटोकॉल के उन पहलुओं पर विशेष जोर रखा है, और 2 Ca द्वारा प्रदान अक्षतंतु अस्तित्व को सुनिश्चित करने + कटे अक्षतंतु अंत की सील को बढ़ावा देने के लिए. निम्न आत्मीयता dextran संयुग्मित Ca 2 + fluo-4 और rhod जैसे संकेतक, उपलब्ध है जो एक उच्च संकेत से शोर अनुपात दिखाने जबकि न्यूनतम + गतिशीलता presynaptic 2 Ca में खलल न डालें . Dextran – संयुग्मन को रोकने Ca 2 + संकेतक mitochondria जैसे organelles में तनहा जा रहा में मदद करता है. लोड हो रहा तकनीक लार्वा भ्रूण, और वयस्कों के लिए समान रूप से लागू किया जा सकता है.
Protocol
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Schneider’s Insect Medium | Reagent | Sigma | S0146 | must contain L-glutamine and calcium |
| L-glutamic acid monosodium salt hydrate | Reagent | Sigma | G1626 |
References
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