Préparation et de la culture de tranches de poulet auditive du tronc
Summary
Le tronc cérébral du poulet est composé de noyaux responsable du traitement des sons binauraux. Une préparation seule tranche coronale maintient tout le circuit alors que l'approche de culture fournit une préparation unique pour étudier le développement de la structure neuronale et de la fonction auditive au niveau moléculaire, cellulaire et réseau.
Abstract
Le tronc cérébral du poulet est un système modèle bien établi qui a été largement utilisée pour étudier l'anatomie et la physiologie du système auditif à des périodes discrètes du développement de 1-4 ainsi que les mécanismes de codage temporel dans le système nerveux central 5-7.
Nous présentons ici une méthode pour préparer les tranches de poulet auditifs du tronc cérébral qui peut être utilisé pour des procédures expérimentales aiguës ou de tranches de culture organotypique à long terme des manipulations expérimentales.
Le tronc cérébral est composé de poulet angularis noyau, magnocellularis, olive laminaris et supérieures. Ces noyaux sont responsables du traitement des sons binauraux et unique préparation tranche coronale de préserver tout le circuit. Finalement, les cultures organotypique peut fournir l'occasion de manipuler plusieurs paramètres du développement tels que l'activité synaptique, l'expression de composants pré-et post-synaptiques, l'expression de l'excitabilité des aspects de contrôle et de l'expression différentielle des gènes
Cette approche peut être utilisée pour élargir les connaissances générales sur le développement des circuits neuronaux, de raffinement et de la maturation.
Protocol
Discussion
Depuis plusieurs décennies, la préparation de tranches aiguë du tronc cérébral du poulet a été utilisée pour étudier le traitement auditif 9, 10. Cette approche a fourni une énorme quantité de données in vitro sur le traitement binaural physiologiques des deux états de développement et de maturité 4, 11, 12. On connaît bien ce circuit très spécialisé et le rôle de chaque noyau joue dans le traitement temporel des sons 13, 14. En fait, à court terme …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Actuels et anciens membres du laboratoire Rubel.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chicken ACSF | ||||
| NaCl | Fisher Scientific | M-11624 | 130 mM | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | M-10576 | 26 mM | |
| KCl | Sigma | P-9333 | 3 mM | |
| NaH2PO4 | Sigma | S-8282 | 1.25 mM | |
| Glucose | Sigma | G-7528 | 10 mM | |
| MgCl2 | Fisher Scientific | M33-500 | 1 mM | |
| CaCl2 | Acros Organics | 423525000 | 2 mM | |
| Chicken culture medium (store at 4°C) | ||||
| advanced minimum essential medium (with NEAA, sodium pyruvate at 110 mg/l, without L-glutamate) | Gibco Invitrogen | 12492-013 | 48.00% | |
| Earl’s balanced salt solution | Sigma | E-2888 | 24.00% | |
| L-glutamine (200 mM) | Sigma | G-7513 | 1.00% | |
| Glucose solution (200 g/l, sterile filtered) | Sigma | G-7528 | 2.75% | |
| horse serum (heat inactivated, sterile filtered) | Sigma | H-1138 | 24.00% | |
| Penicillin-streptomycin* | Sigma | P-0781 | 1.00 ml * = Add to 100 ml culture medium if needed to prevent contamination |
|
| Specific equipment | ||||
| Millicell-CM cell culture inserts | PICMORG50 | Millipore | ||
| 6-well plate | 6 Well Cell Culture Cluster | Corning Incorporated | ||
| Incubator | Forma Scientific CO2 Water Jacketed Incubator | Forma Scientific |
References
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