הכנה והתרבות של שמיעתית פרוסות עוף גזע המוח
Summary
גזע המוח השמיעתית עוף מורכבת גרעינים אחראי לעיבוד צליל binaural. הכנה אחד פרוסה העטרה שומרת את כל המעגלים, בעוד גישה תרבותית מספק הכנה מיוחדת כדי לחקור את התפתחות מבנה ותפקוד עצבי השמיעה ברמה המולקולרית, התאית הרשת.
Abstract
גזע המוח השמיעתית עוף היא מערכת מבוססת מודל, שבו נעשה שימוש נרחב כדי ללמוד את האנטומיה והפיזיולוגיה של עיבוד שמיעתי בתקופות דיסקרטי הפיתוח 1-4, כמו גם מנגנוני קידוד הזמני במערכת העצבים המרכזית 5-7.
כאן אנו מציגים שיטה להכין עוף גזע המוח השמיעתית פרוסות כי ניתן להשתמש הפרוצדורות חריפה או פרוסות תרבות organotypic לטווח ארוך מניפולציות ניסיוני.
גזע המוח השמיעתית עוף מורכב angularis גרעין, זית magnocellularis, laminaris מעולה. גרעינים אלה אחראי לעיבוד צליל binaural חד ההכנות פרוסה העטרה לשמר את המעגלים כולו. בסופו של דבר, תרבויות פרוסה organotypic יכול לספק את ההזדמנות כדי לתפעל מספר פרמטרים התפתחותיים כגון הפעילות הסינפטית, ביטוי של מרכיבים טרום postsynaptic, ביטוי של רגישות להיבטים השליטה גן ביטוי ההפרש
גישה זו יכולה לשמש כדי להרחיב את הידע הכללי על התפתחות המעגל העצבי עידון, והתבגרות.
Protocol
Discussion
במשך כמה עשורים, להכנת פרוסה חריפה של גזע המוח עוף שימש ללמוד עיבוד שמיעתי 9, 10. גישה זו סיפקה כמות עצומה של חוץ גופית נתונים פיזיולוגיים על עיבוד binaural משני מצבים התפתחותיים בוגרת 4, 11, 12. הרבה ידוע על המעגל הזה מאוד מיוחדים ואת תפקיד גרעין כל משחק בעיבוד…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
בהווה ובעבר חברי רובל מעבדה.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chicken ACSF | ||||
| NaCl | Fisher Scientific | M-11624 | 130 mM | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | M-10576 | 26 mM | |
| KCl | Sigma | P-9333 | 3 mM | |
| NaH2PO4 | Sigma | S-8282 | 1.25 mM | |
| Glucose | Sigma | G-7528 | 10 mM | |
| MgCl2 | Fisher Scientific | M33-500 | 1 mM | |
| CaCl2 | Acros Organics | 423525000 | 2 mM | |
| Chicken culture medium (store at 4°C) | ||||
| advanced minimum essential medium (with NEAA, sodium pyruvate at 110 mg/l, without L-glutamate) | Gibco Invitrogen | 12492-013 | 48.00% | |
| Earl’s balanced salt solution | Sigma | E-2888 | 24.00% | |
| L-glutamine (200 mM) | Sigma | G-7513 | 1.00% | |
| Glucose solution (200 g/l, sterile filtered) | Sigma | G-7528 | 2.75% | |
| horse serum (heat inactivated, sterile filtered) | Sigma | H-1138 | 24.00% | |
| Penicillin-streptomycin* | Sigma | P-0781 | 1.00 ml * = Add to 100 ml culture medium if needed to prevent contamination |
|
| Specific equipment | ||||
| Millicell-CM cell culture inserts | PICMORG50 | Millipore | ||
| 6-well plate | 6 Well Cell Culture Cluster | Corning Incorporated | ||
| Incubator | Forma Scientific CO2 Water Jacketed Incubator | Forma Scientific |
References
- Howard, M. A., Burger, R. M., Rubel, E. W. A developmental switch to GABAergic inhibition dependent on increases in Kv1-type K+ currents. J Neurosci. 27, 2112-2123 (2007).
- Kuba, H., Koyano, K., Ohmori, H. Development of membrane conductance improves coincidence detection in the nucleus laminaris of the chicken. J Physiol. 540, 529-542 (2002).
- Gao, H., Lu, Y. Early development of intrinsic and synaptic properties of chicken nucleus laminaris neurons. Neuroscience. 153, 131-143 (2008).
- Sanchez, J. T., Wang, Y., Rubel, E. W., Barria, A. Development of glutamatergic synaptic transmission in binaural auditory neurons. J Neurophysiol. 104, 1774-1789 (2010).
- Jackson, H., Hackett, J. T., Rubel, E. W. Organization and development of brain stem auditory nuclei in the chick: ontogeny of postsynaptic responses. J Comp Neurol. 210, 80-86 (1982).
- Rubel, E. W., Parks, T. N. Organization and development of brain stem auditory nuclei of the chicken: tonotopic organization of n. magnocellularis and n. laminaris. J Comp Neurol. 164, 411-433 (1975).
- Rubel, E. W., Smith, D. J., Miller, L. C. Organization and development of brain stem auditory nuclei of the chicken: ontogeny of n. magnocellularis and n. laminaris. J Comp Neurol. 166, 469-489 (1976).
- Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J Neurosci Methods. 37, 173-182 (1991).
- Reyes, A. D., Rubel, E. W., Spain, W. J. Membrane properties underlying the firing of neurons in the avian cochlear nucleus. J Neurosci. 14, 5352-5364 (1994).
- Monsivais, P., Rubel, E. W. Accommodation enhances depolarizing inhibition in central neurons. J Neurosci. 21, 7823-7830 (2001).
- Lu, T., Trussell, L. O. Development and elimination of endbulb synapses in the chick cochlear nucleus. J Neurosci. 27, 808-8017 (2007).
- Kuba, H., Yamada, R., Fukui, I., Ohmori, H. Tonotopic specialization of auditory coincidence detection in nucleus laminaris of the chick. J Neurosci. 25, 1924-1934 (2005).
- Trussell, L. O. Cellular mechanisms for preservation of timing in central auditory pathways. Curr Opin Neurobiol. 7, 487-492 (1997).
- Trussell, L. O. Synaptic mechanisms for coding timing in auditory neurons. Annu Rev Physiol. 61, 477-496 (1999).
- Sorensen, S. A., Rubel, E. W. The level and integrity of synaptic input regulates dendrite structure. J Neurosci. 26, 1539-1550 (2006).
