Het beoordelen van Signalering Eigenschappen van ectodermale epitheel Tijdens craniofaciale ontwikkeling
Summary
Dit artikel beschrijft een weefseltransplantatie techniek die is ontworpen om de signalering en patroonvorming eigenschappen van de oppervlakte Cephalic ectoderm tijdens de craniofaciale ontwikkeling test.
Abstract
De toegankelijkheid van aviaire embryo's heeft geholpen experimentele embryologen begrijpen het lot van cellen tijdens de ontwikkeling en de rol van weefsel interacties die patronen en morfogenese van de gewervelde dieren (bijv. 1, 2, 3, 4) te regelen. Hier, illustreren we een methode die deze toegankelijkheid exploiteert aan de signalering en patroonvorming eigenschappen van de ectodermale weefsels te testen tijdens het gezicht ontwikkeling. In deze experimenten, maken we kwartel-chick 5 of muis-chick 6 hersenschimmen door het transplanteren van het oppervlak cefalische ectoderm dat de bovenkaak van de kwartel of de muis dekt op ofwel de dezelfde regio of een buitenbaarmoederlijke regio van kippenembryo's. Het gebruik van kwartels als donor weefsel voor transplantatie in kuikens werd ontwikkeld om te profiteren van een hergroepering van nucleoli marker aanwezig is in kwartel, maar niet kuiken cellen, waardoor de onderzoekers voor het hosten en de donor weefsels 7 te onderscheiden. Ook een repetitief element aanwezig is in de muis genoom en is alomtegenwoordig uitgedrukt, waardoor we gastheer en donor weefsels te onderscheiden in de muis-chick hersenschimmen 8. Het gebruik van de muis ectoderm als donor weefsel zal sterk uit te breiden ons begrip van deze weefsel interacties, want dit zal ons toelaten om de signalering eigenschappen van ectoderm ontleend aan diverse mutant embryo's te testen.
Protocol
Discussion
Met behulp van deze transplantatie methode heeft ons toegestaan om te bepalen dat het ectoderm signalering informatie die dorsoventral polariteit en proximodistal uitbreiding van de bovenkaak regelt bevat. De gelijkenis van de uitkomsten bij het gebruik van kwartel of de muis ectoderm, en het behoud van de moleculaire signalen in dit weefsel onder veel diersoorten 6,11 geeft aan dat dit een zeer goed geconserveerd signalering centrum onder de gewervelde dieren. Bovendien hebben andere onderzoekers…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd gefinancierd door R01-R01-DE018234 en DE019638.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1x PBS | TEK | TEKZR114 | ||
| DMEM | UCSF | CCFDA003 | ||
| BSA | SIGMA | A7906 | ||
| Dispase | GIBCO | 17105-041 | ||
| 35×10 mm Petri dish | Falcon | 1008 | ||
| No. 5 Dumont forceps | Fine Science Tools | 11252-20 | ||
| Scissors | Fine Science Tools | 14058-11 | ||
| Spring Scissors | Fine Science Tools | 15010-11 | ||
| Needle holder | Fine Science Tools | 26016-12 | ||
| Tungsten Needle | Fine Science Tools | 26000 | ||
| Microcapillary tube | Drummond Scientific Company | 3-000-225-G | ||
| Pasteur Pipets | Fisher | 13-678-6B | ||
| Spring scissors | Fine Science Tools | 15010-11 | ||
| Blade holder | Fine Science Tools | 10052-11 | ||
| Razor blade | Fine Science Tools | 10050-00 |
References
- Noden, D. M. The Role of the Neural Crest in Patterning of Avian Cranial Skeletal, Connective, and Muscle Tissues. Developmental Biology. 96, 144-144 (1983).
- Bronner-Fraser, M., Stern, C. Effects of Mesodermal Tissues on Avian Neural Crest Cell Migration. Developmental Biology. 143, 213-213 (1991).
- Schneider, R. A. Neural crest can form cartilages normally derived from mesoderm during development of the avian head skeleton. Developmental Biology. 208, 441-441 (1999).
- Couly, G. Interactions between Hox-negative cephalic neural crest cells and the foregut endoderm in patterning the facial skeleton in the vertebrate head. Development. 129, 1061-1061 (2002).
- Evans, D. J., Noden, D. M. Spatial relations between avian craniofacial neural crest and paraxial mesoderm cells. Dev Dyn. , (2006).
- Hu, D., Marcucio, R., Helms, J. A. A zone of frontonasal ectoderm regulates patterning and growth in the face. Development. 130, 1749-1749 (2003).
- Hu, D., Marcucio, R. S. Unique organization of the frontonasal ectodermal zone in birds and mammals. Dev Biol. 325, 200-200 (2009).
- Le Lièvre, C. S., Le Douarin, N. M. Mesenchymal derivatives of the neural crest: analysis of chimaeric quail and chick embryos. Journal of Embryology and Experimental Morphology. 34, 125-125 (1975).
- Bollag, R. J. Use of a repetitive mouse B2 element to identify transplanted mouse cells in mouse-chick chimeras. Exp Cell Res. 248, 75-75 (1999).
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing chicken eggs for developmental studies. J Vis Exp. , (2007).
- Eames, B. F., Schneider, R. A. Quail-duck chimeras reveal spatiotemporal plasticity in molecular and histogenic programs of cranial feather development. Development. 132, 1499-1499 (2005).
- Odent, S. Expression of the Sonic hedgehog (SHH ) gene during early human development and phenotypic expression of new mutations causing holoprosencephaly. Hum Mol Genet. 8, 1683-1683 (1999).
- Szabo-Rogers, H. L. Novel skeletogenic patterning roles for the olfactory pit. Development. 136, 219-219 (2009).
