חוט השדרה Electrophysiology II: ייצור תאי אלקטרודה יניקה
Summary
הפגנה של ייצור ושימוש אלקטרודה יניקה תאיים המשמשת למדידת אלקטרו הקלטות של מיתרי מכרסם השדרה בילוד<em> במבחנה</em
Abstract
פיתוח circuitries עצבי תנועה ניתן ללמוד באמצעות מכרסם בילוד חוט השדרה המרכזי דפוס גנרטור (CPG) התנהגות. אנו להדגים שיטה לייצר אלקטרודות שאיבה המשמשים לבחינת פעילות CPG, או תנועה פיקטיבי, על מיתרי מכרסם גזור השדרה. מיתרי מכרסם השדרה ממוקמים הנוזל השדרתי מלאכותי לשורשי הגחון נמשכים אל האלקטרודה יניקה. אלקטרודה בנויה על ידי שינוי אלקטרודה יניקה זמינים מסחרית. חוט כסף כבד משמש במקום חוט תקן שניתן על ידי האלקטרודה זמינים מסחרית. קצה הזכוכית על האלקטרודה מסחרי מוחלף עם קצה פלסטיק עמידות מוגברת. אנחנו מכינים אלקטרודות נמשך יד אלקטרודות עשויות בגדלים מסוימים של צינורות, המאפשר שחזור עקביות. הנתונים נאספו באמצעות מגבר ורכישת תוכנה neurogram. הקלטות מבוצעות על שולחן האוויר בתוך כלוב פאראדיי כדי למנוע הפרעות מכניות וחשמליות, בהתאמה.
Protocol
Discussion
התפתחות מערכת העצבים ניתן ללמוד באמצעות מיתרי מכרסם מבודד השדרה. בנוכחות של נוירוטרנסמיטורים, תנועה פיקטיבי יכול להיווצר מתוך חוט השדרה בצורת פעילות בדוגמת חשמל 1,3. התפרצויות אלה קצבית מיוצרים הרץ 0.2-0.5 ו – הם בדוגמת ב החילופים משמאל לימין ו-extensor מכופף. בשלבים הת…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
סמואל ל Pfaff הוא פרופסור במעבדות ביטוי גנים במכון סאלק למחקרים ביולוגיים החוקר את הווארד יוז רפואי במכון. עבודה זו נתמכה על ידי כריסטופר ודנה ריב קרן. ג'ו Belcovson, קנט Schnoeker ומייק סאליבן ב משאבי מולטימדיה במכון סאלק סיוע בצילום ועריכה.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PTFE Sub Lite Wall Tubing (Small tubing) | Zeus | 36AWG | 0.005”ID x 0.003” Wall (Small Parts) Also available in 0.003” to 0.006” | |
| Large tubing (0.86mm (0.34”)) | Clay Adams Brand Intramedic Becton Dickinson and Company | 427420 | 0.86mm (0.34”) O.D. 1.27mm (.050”) | |
| Electrode Barrel | A-M Systems | 573000 | ||
| Adhesive | JB Weld | |||
| Adhesive: Silicone caulk | ||||
| Solder and soldering iron | ||||
| Bleach | ||||
| Xylene | ||||
| Silver wire: 0.010” | A-M Systems | |||
| Insect pins: Austerlitz 0.1mm | Fine Science Tools | 26002-10 | ||
| Magnetic Stand | Narishige | GJ-8 | ||
| Micromanipulator | Narishige | MN 151 | ||
| Miniboard (Headstage) | Grass Industries | F-15EB/B1 | ||
| Polyview Adaptor Unit | Grass Industries | PVA 8 | ||
| Bipolar Portable Physiodata Amplifier System | Grass Industries | 15LT | ||
| ANALOG TO DIGITAL CARD | National Instruments | 6035E | ||
| Air Table; Vibraplane | Kinetic Systems |
References
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal cord electrophysiology. J Vis Exp. , (2010).
- Gallarda, B. W. Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling. Science. 320, 233-236 (2008).
- Landmesser, L. The development of motor projection patterns in the chick hind limb. J Physiol. 284, 391-414 (1978).
- Myers, C. P. Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits. Neuron. 46, 37-49 (2005).
- Chanin, M. The determination of chloride by use of the silver-silver chloride electrode. Science. 119, 323-324 (1954).
- Goulding, M. Circuits controlling vertebrate locomotion: moving in a new direction. Nat Rev Neurosci. 10, 507-518 (2009).
