Asimetrik Reseptör Desenler Hücre Rolling Yörüngeler incelenmesi
Summary
Biz asimetrik reseptör-desenli yüzeyler üzerinde hücre haddeleme yörüngelerini gözlemlemek ve analiz etmek için bir protokol açıklar. Ortaya çıkan veriler etiket ücretsiz cep ayırma ve analiz için reseptör-desenli yüzeylerin mühendisliği için yararlıdır.
Abstract
Yanal deplasman asimetrik reseptör desenleri üzerinde yuvarlanan bir akış akışa dik hücreleri, hücreler 1 etiket ayırma ve analiz için yeni cihazlar geliştirilmesi için bir fırsat sunar . Bu tür cihazlar sürekli akış ayrılması, ya da farklı hücre fenotipleri veya reseptör ekspresyonu düzeyleri birbirinden ayırt etmek yapışma modüle reseptör desen yanal deplasman kullanabilirsiniz. Hücre reseptör-desenli yüzeyler üzerinde yuvarlanma yörüngeleri doğasını anlamak yüzeyleri ve bu tür cihazların tasarım mühendisliği için gerekli.
Burada, biz, hücre haddeleme yapışma 2 destekleyen asimetrik reseptör desen hücre haddeleme yörüngeleri eğitim için bir protokol göstermektedir . İyi tanımlanmış, P-selektin reseptörleri mikron çaplı bir desen, bir akış odasında dahil edildi altın kaplı slaytlar üzerinde baskı microcontact kullanılarak imal edildi. PSGL-1 ligand 3 ifade HL60 hücreleri desenli çizgiler bir alan boyunca aktı ve ters bir aydınlık alan mikroskobu görüntülendi. Hücreler lateral çökme 1 desen eğimli kenarları boyunca rulo ve paletli. Her hücre, tipik olarak belirli bir mesafe (kenar izleme uzunluğu olarak tanımlanır) desen kenarlarında haddelenmiş kenarına kopuk ve bir alt-desen yatışma. Bu dekolmanı zor akışını odasına çıkmak için girişten itibaren bir hücrenin tüm yörünge takip hale getirse de, parçacık izleme yazılımı, tek bir reseptör üzerinde hareket olduğu zaman yuvarlanma sırasında hücrelerin yörüngeleri analiz ve verim desenli hat. Yörüngeleri, daha sonra hücre haddeleme hızları ve her hücre için farklı desen izleme kenar uzunlukları dağılımları elde etmek için incelendi.
Bu protokol, hücre reseptör desen haddeleme yörüngeleri ölçülmekte ve desen açısı ve kayma gerilmesi gibi bu mühendislik parametrelerini ilgili yararlıdır. Bu tür veriler, etiket hücre ayırma ve analiz için mikroakışkan cihazların tasarımı için faydalı olacaktır.
Protocol
Discussion
Biz microcontact baskı 2 kullanılarak üretilen asimetrik reseptör desenli yüzeyler hücre haddeleme yörüngeleri incelemek için bir protokol tanımlanmıştır. PEG ve P-selektin alanlar arasında belirgin kontrast gösteren desenli yüzey optik mikroskop görüntüleri damgalama başarılı olup olmadığını teyit etmek için kullanılabilir. Keskin, düz kenarlar damgalama iyi yapıldığında görülebilir. Hard damga basarak desen hassas sınırlar damga deformasyona neden olabilir. Dalgalı kena…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu proje, MIT'de Deshpande Teknolojik Yenilik Merkezi (RK ve JMK) ve Kimyasal ve Biyolojik Ayrımları programı ile RK NSF KARİYER ödül 0.952.493 tarafından desteklenmiştir. Biz Asker Nanoteknolojiler (ISN) ve tesislerin kullanımı için MIT'de Microsystems Teknoloji Laboratuvarı (MTL) Institute for teşekkür ederim.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Human promyelocytic leukemia cells | ATCC | CCL-240 | HL60 cells | |
| Gold-coated glass slides | EMF | TA134 | Gold slides | |
| (1-Mercaptoundec-11-yl)tetra(ethylene glycol) | Sigma-Aldrich | 674508 | PEG | |
| Recombinant human P-selectin | R&D Systems Inc. | ADP3-050 | P-selectin | |
| Bovine serum albumin | Rockland Immunochemicals, Inc. | BSA-50 | BSA | |
| Dulbecco’s phosphate buffered saline | Mediatech Inc. | 21-030 | DPBS | |
| Sulfuric acid | Sigma-Aldrich | 339741 | ||
| Hydrogen peroxide | Sigma-Aldrich | 316989 |
References
- Karnik, R., Hong, S., Zhang, H., Mei, Y., Anderson, D. G., Karp, J. M., Langer, R. Nanomechanical control of cell rolling in two dimensions through surface Patterning of receptors. Nano Lett. 8 (4), 1153-1158 (2008).
- Lee, C. H., Bose, S., Van Vliet, K. J., Karp, J. M., Karnik, R. Examining Lateral Displacement of HL60 Cells Rolling on Asymmetric P-selectin Patterns. Langmuir. 27 (1), 240-249 (2011).
- Norman, K. E., Moore, K. L., McEver, R. P., Ley, K. Leukocyte rolling in-vivo is mediated by p-selectin glycoprotein ligand-1. Blood. 86 (12), 4417-4421 (1995).
- Bernard, A., Delamarche, E., Schmid, H., Michel, B., Bosshard, H. R., Biebuyck, H. Printing patterns of proteins. Langmuir. 14 (9), 2225-2229 (1998).
- James, C. D., Davis, R. C., Kam, L., Craighead, H. G., Isaacson, M., Turner, J. N., Shain, W. Patterned protein layers on solid substrates by thin stamp microcontact printing. Langmuir. 14 (4), 741-744 (1998).
- Mrksich, M., Whitesides, G. M. Using self-assembled monolayers to understand the interactions of man-made surfaces with proteins and cells. Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 25, 55-78 (1996).
- Tan, J. L., Tien, J., Chen, C. S. Microcontact printing of proteins on mixed self-assembled monolayers. Langmuir. 18 (2), 519-523 (2002).
- Lee, D., King, M. R. Microcontact Printing of P-Selectin Increases the Rate of Neutrophil Recruitment Under Shear Flow. Biotechnology Progress. 24 (5), 1052-1059 .
- Greenberg, A. W., Hammer, D. A. Cell separation mediated by differential rolling adhesion. Biotechnol. Bioeng. 73 (2), 111-124 (2001).
- Higuchi, A., Tsukamoto, Y. Cell separation of hepatocytes and fibroblasts through surface-modified polyurethane membranes. J. Biomed. Mater. Res. Part A. 71A (3), 470-479 (2004).
- Alexeev, A., Verberg, R., Balazs, A. C. Patterned surfaces segregate compliant microcapsules. Langmuir. 23 (3), 983-987 (2007).
