で、アクティブなゾーンの解剖とイメージングショウジョウバエ神経筋接合部
Summary
の神経筋接合部（NMJ）<em>キイロショウジョウバエ</em>正常なシナプス機能だけでなく、特定の神経疾患に見られるシナプス機能への摂動を研究するための重要なモデル系である。我々は解剖のためのプロトコルを提示<em>ショウジョウバエ</emNMJ内のアクティブゾーン蛋白質のための>幼虫のモータシステムと免疫染色。
Abstract
ショウジョウバエ幼虫神経筋接合部（NMJ）は、シナプスの構造と機能の研究のための優れたモデルである。 ショウジョウバエは、強力な遺伝子操作の容易さのためによく知られており、幼虫の神経系は正常な機能にも乱れていないだけの研究に特に役立っていますそれは、いくつかの神経疾患（ロイドとテイラー、2010年）同行。 ショウジョウバエに見られる多くの重要なシナプス分子はまた、哺乳類で発見され、ほとんどのCNS のような哺乳動物ではシナプスを興奮している、 ショウジョウバエ NMJはグルタミン酸作動性であり、活性依存性リモデリング（島ら 、2000）を示しています。それらの神経支配のパターンは、ステレオタイプとそれが可能などの運動ニューロンとそれが支配することが体壁筋線維（Keshishianと金、2004）との間のものとして特定されたシナプスの端末を、勉強することの繰り返しなので、さらに、 ショウジョウバエの神経細胞を個別に識別することができます。遺伝子と物理操作の容易さとともに、進化的に保存シナプスのコンポーネントの存在は、シナプス機能（Budnik、1996）基礎となるメカニズムを調べるためのショウジョウバエモデルに最適です。
これらは神経伝達物質の放出の部位であるので、シナプスの端末でアクティブなゾーンは、特に興味深いものである。 NC82は、 ショウジョウバエのタンパク質Bruchpilot（BRP）、アクティブゾーン（Wagh ら 、2006）の重要なコンポーネントであるCAST1/ERC家族を認識するモノクローナル抗体である。 BRPは、直接、アクティブなゾーンのT -バーを形成することが示さと効果的にTバーの密度の下のCa 2 +チャネル（フーケら 、2009）クラスタリングを担当した。 BRPの変異体は、Ca 2を削減しました+チャネルの密度は、落ち込んで誘発小胞放出、および変更された短期可塑性（キッテルら 、2006）。アクティブなゾーンへの変化は、 ショウジョウバエの疾患モデルで観察されている。例えば、NC82抗体を用いた免疫蛍光は、アクティブなゾーンの密度が筋萎縮性側索硬化症とピット-ホプキンス症候群のモデルで減少したことを示した（Ratnaparkhi ら、2008;。。Zweierら 、2009）。したがって、アクティブなゾーン、または他のシナプス蛋白質の評価は、疾患のショウジョウバエの幼虫のモデルでシナプスの欠陥の存在の貴重な初期の手がかりを提供することがあります。
NMJの免疫蛍光分析のための準備ホールマウント解剖ショウジョウバエの幼虫は、いくつかのスキルが必要ですが、少し練習すれば、ほとんどの科学者によって行うことができます。発表は各遺伝子型間の環境の違いを制限し、再現性と統計分析の信頼性のために十分な動物を提供する、解剖と同じ解剖皿の中で免疫染色するために複数の幼虫のために提供する方法です。
Protocol
Discussion
ニューロンは、シナプス終末の面積は非常に重要であり、そしてポストとシナプス前細胞との間の適切な通信のためのブリッジです。疾患モデルにおけるニューロンの健康を調査する強力な方法は、免疫蛍光法によりシナプス末端のタンパク質を分析することです。ここで紹介する免疫蛍光法では、グループ間の環境の違いを制限しながら、研究者は、同時に多くの幼虫を調べることができ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、この原稿についての有益なコメントのために博士Nael Alamiと博士ナムチョルキムに感謝。
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Base | Dow Corning | 68037-59-2 | After mixing allow for bubbles to rise slowly out by putting on slow rotator or allowing to sit for 30 minutes or more. |
| Stainless Steel Minutien PIns | Fine Science Tools | 26002-10 | Trim to approx. 3-4mm in length with regular scissors |
| Laminectomy Forceps (Blunt- Used for grasping pins) | Fine Science tools | 11223-20 | Use as blunt forceps for grasping pins |
| Dissection Forceps | World Precision Instruments | 501985 | |
| SuperFine Vannas Scissors, 8cm long | World Precision Instruments | 501778 | |
| Mouse anti-Brp antibody | DSHB | NC82 | Use 1:50 dilution |
| Cy3 Affinipure Goat Anti-Horseradish Peroxidase | Jackson Immunoresearch | 123-165-021 | Use at 1:200 dilution |
| Alexa Fluor 488 Goat anti-Mouse IgG | Invitrogen | A11001 | Use approx. 1:200 dilution |
References
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