在活动区域的解剖和影像果蝇神经肌肉交界处
Summary
神经肌肉接头（NMJ）<em>果蝇</em>是一个重要的模型系统，为研究正常的突触功能以及某些神经系统疾病中发现的突触功能的扰动。我们提出了一个解剖的协议<em>果蝇</em>幼虫电机系统和免疫活性区蛋白内NMJ。
Abstract
果蝇幼虫神经肌肉接头（NMJ）突触的结构和功能研究的一个很好的模型。果蝇是缓解强大的遗传操作和幼虫的神经系统已被证明不仅在学习的正常功能特别有用，但也扰动伴随一些神经系统疾病（Lloyd和泰勒，2010）。在果蝇中发现的许多关键的突触分子还发现，在哺乳动物中，最喜欢在哺乳动物中枢神经系统兴奋性突触，果蝇NMJ是谷氨酸和演示活动依赖的重塑（Koh等 ， 2000）。此外， 果蝇的神经细胞可以单独确定，因为他们的神经支配模式都是千篇一律和重复，使我们能够研究确定的突触终端，如运动神经元和体壁肌纤维之间，他们支配（Keshishian和Kim ，2004）。进化上保守的突触组件以及与遗传和体质操纵缓解的存在， 使得果蝇调查的内在机制，突触功能的（Budnik 1996）的理想模型。
在突触终端的活动区域特别感兴趣，因为这些神经递质释放的网站。 NC82是一种单克隆抗体，能够识别的果蝇蛋白Bruchpilot（BRP），CAST1/ERC家庭成员的活动区（Wagh 等人 ，2006年），是一个重要组成部分。 BRP是直接形成活动区的T -酒吧，并负责有效聚类的Ca 2 +通道下方的T -酒吧密度（富凯等人，2009年） 。 BRP突变体减少的Ca 2 +通道密度，郁闷诱发囊泡释放，并改变短期的可塑性（ 基特尔等，2006） 。活跃区的改建已发现在果蝇的疾病模型。例如，使用的NC82抗体的免疫荧光显示，活跃的区域密度下降在肌萎缩性脊髓侧索硬化症和皮特霍普金斯综合征（Ratnaparkhi等，2008; Zweier等，2009）。模型。因此，活跃的区域，或其他疾病的果蝇幼虫模型，突触蛋白的评价可能会提供一个宝贵的初步线索，一个突触缺陷的存在。
准备整个安装解剖果蝇幼虫的免疫分析NMJ需要一些技巧，但可以稍加练习，大多数科学家所完成。是提供多个幼虫在同一解剖盘解剖和免疫染色方法，限制各基因型之间的环境差异，并提供足够的动物重现性和统计分析的信心。
Protocol
Discussion
神经元突触终端领域是至关重要的，是适当的沟通后，突触前细胞之间的桥梁。调查疾病模型的神经元的健康，是一种强有力的方式分析，免疫荧光蛋白质的突触终端。这里介绍的免疫荧光法，使研究者检查许多幼虫的同时，限制群体之间的环境差异。 果蝇三龄幼虫的中央神经系统有许多优点，包括谷氨酸的突触，突触末端，交通方便，重现性和遗传操作的权力映射和重复。特别在果?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢他们对这个手稿的有益的意见Nael阿拉米博士和博士南澈金。
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Base | Dow Corning | 68037-59-2 | After mixing allow for bubbles to rise slowly out by putting on slow rotator or allowing to sit for 30 minutes or more. |
| Stainless Steel Minutien PIns | Fine Science Tools | 26002-10 | Trim to approx. 3-4mm in length with regular scissors |
| Laminectomy Forceps (Blunt- Used for grasping pins) | Fine Science tools | 11223-20 | Use as blunt forceps for grasping pins |
| Dissection Forceps | World Precision Instruments | 501985 | |
| SuperFine Vannas Scissors, 8cm long | World Precision Instruments | 501778 | |
| Mouse anti-Brp antibody | DSHB | NC82 | Use 1:50 dilution |
| Cy3 Affinipure Goat Anti-Horseradish Peroxidase | Jackson Immunoresearch | 123-165-021 | Use at 1:200 dilution |
| Alexa Fluor 488 Goat anti-Mouse IgG | Invitrogen | A11001 | Use approx. 1:200 dilution |
References
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