Metabolik Etiketleme ve Bioorthogonal tıklayın Kimya Zebra balığı Embriyolar Görüntüleme glukanlardır
Summary
Zebra balığı embriyolar alkin etiketli glukanlardır hızlı, noninvaziv ve sağlam etiketleme için izin veren bir tıkla-kimya temelli yöntem açıklanmıştır. Bu çalışmada geç gastrulasyon aşamasında zebrafish embriyoların saran tabaka Fucosylated glukanlardır görüntülenmiştir.
Abstract
In vivo Görüntüleme glukanlardır azid veya alkin etiketli Monosakkaritler 1, 2 ya da organizma hücreleri tedavi ederek son zamanlarda bir bioorthogonal kimyasal muhabiri stratejisi kullanılarak etkin olmuştur. Glukanıdır biyosentetik makine tarafından işlenen değiştirilmiş Monosakkaritler, hücre yüzeyinde glycoconjugates içine dahil edilmiştir. Bioorthogonal azid veya alkin etiketleri sonra görünüm için floresan problar ile kovalent konjugasyon, izin veya zenginleştirme ve glycoproteomic analiz afinite probları. Saran tabaka fucosylated glukanlardır etiketleme 1) GSYİH-5-alkynylfucose (GSYİH FucAl), 2 ile tek hücreli aşamada embriyo mikroenjeksiyon): Bu protokol da dahil olmak üzere genellikle zebrafish embriyolar fucosylated glukanlardır noninvaziv görüntüleme için kullanılan prosedürler açıklanmaktadır biyouyumlu konfokal mikroskopi 3 Cu (I) katalize azid-alkin Siklokatılma (CuAAC), ve 3) görüntüleme ile azid-konjuge fluorophores zebrafish embriyolar. Burada açıklanan yöntem glukanlardır diğer sınıflar, örneğin glukanlardır içeren sialik asit 4 ve N-acetylgalactosamine 5, 6, gelişmekte olan Zebra balığı ve diğer canlı organizmaların kolayca görselleştirmek için uzatılabilir.
Protocol
Discussion
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Albert Einstein College of Medicine başlangıç fonları; Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (RDS 3U54AI057158-06S1 PW GM093282) tarafından kısmen desteklenmiştir.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalog number |
| Copper(II) sulfate pentahydrate | Sigma-Aldrich | 203165 |
| Alexa Fluor 488 azide | Invitrogen | A10266 |
| dextran, Alexa Fluor 594 | Invitrogen | D-22913 |
| (+)-Sodium L-ascorbate | Sigma-Aldrich | A7631 |
| Bathocuproinedisulfonic acid | Acros Organics | 164060010 |
| Glass bottom microwell dish | MatTek | P35G-1.5-14-C |
References
- Laughlin, S. T., Bertozzi, C. R. Imaging the glycome. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 12-17 (2009).
- Baskin, J. M., Bertozzi, C. R. Bioorthogonal click chemistry: Covalent labeling in living systems. Qsar Comb. Sci. 26, 1211-1219 (2007).
- Soriano del Amo, D. Biocompatible copper(I) catalysts for in vivo imaging of glycans. J. Am. Chem. Soc. 132, 16893-16899 (2010).
- Chang, P. V. Metabolic labeling of sialic acids in living animals with alkynyl sugars. Angew. Chem. Int. Ed. 48, 4030-4033 (2009).
- Laughlin, S. T., Baskin, J. M., Amacher, S. L., Bertozzi, C. R. In vivo imaging of membrane-associated glycans in developing zebrafish. Science. 320, 664-667 (2008).
- Baskin, J. M., Dehnert, K. W., Laughlin, S. T., Amacher, S. L., Bertozzi, C. R. Visualizing enveloping layer glycans during zebrafish early embryogenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 10360-10365 (2010).
- Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation. J. Vis. Exp. , (2009).
- Wang, W. Chemoenzymatic synthesis of GDP-L-fucose and the Lewis X glycan derivatives. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 16096-16101 (2009).
- Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function. J. Vis. Exp. , (2009).
- Westerfield, M. . THE ZEBRAFISH BOOK, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2007).
- Kimmel, C. B., Warga, R. M., Schilling, T. F. Origin and organization of the zebrafish fate map. Development. 108, 581-594 (1990).
