Bağışıklık Hücreleri murin aorta içinde Sitometrisi Analizi
Summary
Bu yazıda, aorta bağışıklık kompozisyonu araştırmak için flow sitometri tabanlı bir yöntem sunmaktadır. Kağıt aynı zamanda çevresindeki adventisya ve damar duvarında ayrı ayrı inceleyerek sağlayan ek bir teknik göstermektedir. Bu yöntem, aort lökositlerin fenotipik analizler gerçekleştirmek ve ateroskleroz çalışmalar için çeşitli immünolojik testleri uygulamak için imkanlar açılır.
Abstract
Ateroskleroz, orta ve büyük boy damarların köpük hücreleri, bağışıklık hücreleri, damar endotel ve düz kas hücreleri, trombositler, ekstrasellüler matriks ve geniş nekroz ile zengin bir lipid çekirdek oluşan plakların oluşumu ile karakterizedir ve kronik inflamatuar süreç çevre dokulara fibrozis. aterosklerozun başlaması, geliştirme ve sebat 1 doğuştan gelen bağışıklık yanıtının ve adaptif silah olarak katılıyor. 2, 3 Orada önemli bir kanıt gibi makrofajlar gibi bağışıklık hücreleri, farklı alt dendritik hücreler, T ve B lenfositleri, sağlıklı ve ateroskleroz eğilimli fareleri 4 aorta içinde mevcut. Ayrıca, bağışıklık hücrelerini çevreleyen aort adventisya aterogenezde bu doku önemli bir rol öneren bulunur. 2
Bir süredir, bağışıklık hücreleri, kendi aktivasyon durumu ve aort duvarının içinde hücresel bileşimi farklı türde kantitatif tespit ateroskleroz çalışması için RT-PCR ve immünhistokimyasal yöntemler ile sınırlıdır. Birkaç denemeden insan aorta kullanılarak flow sitometri gerçekleştirmek için yapılmıştır ve böyle yüksek bir otofloresans gibi bir dizi sorunlar, 5,6 bildirilmiştir. İnsan aterosklerotik plakların kollajenaz 1 ile sindirilir ve boş hücreleri CD14 için toplanan ve boyandı + / CD11c + türevi makrofaj köpük hücreleri vurgulamak için. Bu çalışmada, bir "alay" kanal yanlış pozitif boyanma önlemek için kullanılır oldu. Aort örneklerinde yüksek otofloresans üretir enkaz büyük miktarda artış, sindirim işlemi sırasında biriken 6 Nekrotik malzeme vermek . Bu sorunu gidermek için, negatif ve pozitif kontroller bir panel teklif oldu, fakat bu örnekler sadece çift boyama uygulanan olabilir. Biz bağışıklık hücre kompozisyon analiz ve aktivasyon, çoğalması, bağışıklık hücrelerinin sağlıklı ve ateroskleroz eğilimli aort farklılaşma karakterize etmek için yeni bir akım sitometri tabanlı bir yöntem 7 geliştirdik. Bu yöntem, aort duvarının bağışıklık hücre kompozisyon soruşturma sağlar ve bu hastalık bağışıklık yönlerini araştırmalar için geniş bir yelpazede immünolojik yöntemler kullanmak için imkanlar açılır.
Protocol
Discussion
Burada, fare aorta bağışıklık hücre kompozisyon, soruşturma için bir akış sitometri tabanlı bir yöntem mevcut. Bu yöntemin en büyük avantajı, tek bir hücrenin düzeyde aort bağışıklık hücrelerinin analiz etmek ve aort lökositlerin aktivasyonu durumunu karakterize etmek için yeteneğidir. Bu yöntem, fare aorta sınırlı ve (yayınlanmamış veri) ve diğerleri 10 internal meme arter, aort kapakları ve koroner arterler olarak insan örnekleri analiz etmek için bu yaklaşım değildi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
PO1 HL55798 (KL) ve Amerikan Kalp Derneği Scientist Kalkınma Hibe 0525532U (EG): Bu çalışma Ulusal Sağlık hibe Enstitüleri tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Material | Catalog Number | Company |
| Collagenase XI | C7657 | Sigma-Aldrich |
| Hyaluronidase | H3506 | Sigma-Aldrich |
| DNase I, type 2 | D4527 | Sigma-Aldrich |
| Collagenase I | C0130 | Sigma-Aldrich |
| Collagenase II | LS004174 | Worthington Biochemical Corporation |
| Elastase | LS002292 | Worthington Biochemical Corporation |
References
- Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-2341 (2000).
- Galkina, E., Ley, K. Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis. Annu Rev Immunol. 27, 165-197 (2009).
- Hansson, G. K., Libby, P. The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword. Nat Rev Immunol. 6, 508-519 (2006).
- Galkina, E., Ley, K. Leukocyte influx in atherosclerosis. Curr Drug Targets. 812, 1239-1248 (2007).
- Bonanno, E., Mauriello, A., Partenzi, A., Anemona, L., Spagnoli, L. G. Flow cytometry analysis of atherosclerotic plaque cells from human carotids: a validation study. Cytometry. 39, 158-165 (2000).
- Liu-Wu, Y., Svenningsson, A., Stemme, S., Holm, J., Wiklund, O. Identification and analysis of macrophage-derived foam cells from human atherosclerotic lesions by using a “mock” FL3 channel in flow cytometry. Cytometry. 29, 155-164 (1997).
- Galkina, E., Kadl, A., Sanders, J., Varughese, D., Sarembock, I. J., Ley, K. Lymphocyte recruitment into the aortic wall before and during development of atherosclerosis is partially L-selectin dependent. J Exp Med. 203, 1273-1282 (2006).
- Tung, J. W., Parks, D. R., Moore, W. A., Herzenberg, L. A., Herzenberg, L. A. New approaches to fluorescence compensation and visualization of FACS data. Clin Immunol. 110, 277-283 (2004).
- Smith, E., Prasad, K. M., Butcher, M. Blockade of interleukin-17A results in reduced atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice. Circulation. 121, 1746-1755 (2010).
- Eid, R. E., Rao, D. A., Zhou, J. Interleukin-17 and interferon-gamma are produced concomitantly by human coronary artery-infiltrating T cells and act synergistically on vascular smooth muscle cells. Circulation. 119, 1424-1432 (2009).
