Legatura del cieco procedura di puntura
Summary
Il modello murino di legatura del cieco e la puntura come un prezioso strumento per lo studio della sepsi umana.
Abstract
Sepsi umana è caratterizzata da una serie di reazioni sistemiche in risposta alle infezioni intensiva e massiccia che non è riuscito a essere contenuta a livello locale da parte dell'ospite. Attualmente, si colloca sepsi tra le prime dieci cause di mortalità nelle unità di terapia intensiva Stati Uniti 1. Durante la sepsi ci sono due fasi stabilito emodinamico, che potrebbero sovrapporsi. La fase iniziale (iperdinamica) è definita come una massiccia produzione di citochine proinfiammatorie e le specie reattive dell'ossigeno da parte dei macrofagi e neutrofili che colpisce la permeabilità vascolare (porta a ipotensione), la funzione cardiaca e induce cambiamenti metabolici si conclude con necrosi dei tessuti e insufficienza d'organo. Di conseguenza, la causa più comune di mortalità è danno renale acuto. La seconda fase (hypodynamic) è un anti-infiammatorio processo che coinvolge alterato dei monociti presentazione dell'antigene, diminuzione della proliferazione dei linfociti e la funzione e l'apoptosi aumentata. Questo stato conosciuto come l'immunosoppressione o la depressione immunitaria aumenta nettamente il rischio di infezioni nocosomial e, in definitiva, la morte. I meccanismi di questi processi fisiopatologici non sono ben caratterizzati. Poiché entrambe le fasi di sepsi può causare danni irreversibili e irreparabili, è essenziale per determinare lo stato immunologico e fisiologica del paziente. Questo è il motivo principale per cui molti farmaci terapeutici hanno fallito. Lo stesso farmaco dato a diversi stadi di sepsi può essere terapeutico o comunque nocivi o non hanno alcun effetto 2,3. Per capire sepsi a vari livelli è fondamentale avere un modello animale adeguato e completo che riproduce il decorso clinico della malattia. E 'importante per caratterizzare i meccanismi fisiopatologici che si verificano durante la sepsi e controllare le condizioni di modello per testare potenziali agenti terapeutici.
Per studiare l'eziologia della sepsi umana ricercatori hanno sviluppato diversi modelli animali. Il modello più diffuso clinica è la legatura del cieco e foratura (CLP). Il modello CLP consiste nella perforazione del cieco che permette il rilascio di materiale fecale nella cavità peritoneale di generare una risposta immunitaria indotta esacerbato da infezione polimicrobica. Questo modello soddisfa la condizione umana che è clinicamente rilevante. Come negli esseri umani, i topi sottoposti a CLP con fluidi mostrano il primo (inizio) di fase iperdinamico che nel tempo avanza al secondo (in ritardo) fase hypodynamic. Inoltre, il profilo delle citochine è simile a quello osservato nella sepsi umana, dove vi è una maggiore apoptosi dei linfociti (recensione a 4,5). Grazie ai meccanismi molteplici e sovrapposte coinvolti nella sepsi, i ricercatori hanno bisogno di un modello adatto sepsi di gravità controllati al fine di ottenere risultati coerenti e riproducibili.
Protocol
Discussion
Qui vi mostriamo nel dettaglio come eseguire il modello CLP nei topi e modulare il grado di gravità.
Rispetto ad altri modelli animali di sepsi, CLP può essere eseguita in qualsiasi ceppo di topi di differenti età e sesso. Si tratta di una procedura relativamente semplice e poco costoso intervento chirurgico. In questo modello, il grado di gravità ha un impatto diretto sulla percentuale di sopravvivenza. La lunghezza della legatura, lo spessore dell'ago e il numero di punture sono pa…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto da un finanziamento della Pennsylvania Department of Health.
Dr. Miguel Garcia Toscano è stato Fellow post-dottorato presso la Temple University, finanziato dalla Fondazione Martin Alfonso Escudero durante questo studio.
Vogliamo ringraziare Iliya Yordanov e Kotredes Kevin per la realizzazione del video.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Ketamine | Ketaset | 0856-2013-01 | |
| Xylazine | AnaSed | NADA# 139-236 | |
| Insulin syringe 29G | Exel | 26028 | |
| Silk suture, 6-0 PROLENE | Ethicon | 8680G | |
| 19G and 25G Needle | BD | 305186 | |
| Shaver | General supply | General supply | |
| Infrared Heating lamp | General supply | General supply | |
| Michel wound clips 7mm | Roboz Surgical Instr | RS-9270 | |
| Ear Loop Mask | Fisher Scientific | 19-130-4181 | |
| Dissection scissors | Roboz Surgical Instr | RS-6702 | |
| Betadine solution | VWR | 63410-992 | |
| Surgical forceps | Roboz Surgical Instr | RS-5135 | |
| 70% Isopropyl alcohol pad | Fisher Scientific | 22-031-350 | |
| Buprenorphine | Bedford Labs | 55390-100-10 | |
| Tramadol | Sigma-Aldrich | 42965 |
References
- Angus, D. C. Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care. Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).
- Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. The enigma of sepsis. J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).
- Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes. Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).
- Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. Animal models of sepsis: setting the stage. Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).
- Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury. J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).
- Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis. J Surg Res. 102, 45-49 (2002).
- De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis. Shock. 23, 11-17 (2005).
- Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis. Cytokine. 14, 162-169 (2001).
- Turnbull, I. R. Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture. Shock. 19, 310-313 (2003).
- Miyaji, T. Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice. Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).
- Torres, M. B., De Maio, A. An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome. J Surg Res. 125, 88-93 (2005).
- Doi, K. AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality. Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).
- Wilson, M. A. Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis. J Trauma. 41, 622-627 (1996).
- Zanotti-Cavazzoni, S. L. Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis. Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).
- Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model. Shock. 34, 250-260 (2010).
