原子間力顕微鏡によるイメージングのための細菌の固定化
1Biological and Nanoscale Systems Group, Biosciences Division,Oak Ridge National Laboratory, 2Department of Biochemistry and Cellular and Molecular Biology,University of Tennessee , 3Department of Surgery,Eastern Virginia Medical School, 4Center for Nanophase Materials Sciences Division,Oak Ridge National Laboratory
Summary
住んでいるグラム陰性およびグラム陽性細菌は、ゼラチンコートしたマイカ上に固定し、原子間力顕微鏡（AFM）を用いて液体中に撮像することができます。
Abstract
AFMは、イメージングツールを機械的プローブ表面の高分解能（ナノスケール）です。それは化学的にサンプルを治療することなく、液体環境では、画像セルと生体分子への能力を持っています。この目標を達成するために、サンプルが十分にスキャンAFMのカンチレバーの先端によって加えられる力によって除去を防ぐために、取り付け面に付着する必要があります。多くの例では、成功した画像は、取付面へのサンプルの固定化に依存します。最適に、固定化は、代謝プロセスと機能的な属性が損なわれないように、サンプルへの低侵襲である必要があります。ブタ（豚）、ゼラチンでコーティングしたばかりの劈開マイカの表面によって、負に帯電した細菌が表面に固定化することができるとAFMによる液中に撮像。ゼラチン被覆マイカ上の細菌の細胞の固定化は、負に帯電した細菌と正に帯電したゼラチンの間の静電相互作用に起因する可能性が最も高いです。いくつかの要因は、細菌が中断されている液体の化学成分、ゼラチンコートされたマイカ上の細菌の培養時間、菌株や菌がイメージングされる媒体の表面特性を含む細菌の固定化、妨げになることがあります。全体的に、ゼラチンコートされたマイカの使用は、イメージングの微生物細胞のための一般的に適用可能であることが判明した。
Protocol
1。マイカの準備： AFM顕微鏡（約22 × 30 mm）を合わせて必要なサイズにハサミでマイカを（電子顕微鏡の科学）カット。 唯一の滑らかな連続した層が残るまで、外側の層を除去するためにテープを使用して、一般的に開裂し、両側のマイカ、。 2。ゼラチン溶液の調製： 実験室の瓶に100mlの蒸留水を追加。 水が沸騰し始めるまで電子レ?…
Discussion
様々な要因がAFMによる微生物取付けセルおよびイメージングに影響を与える可能性があります。コーティングのために使用されるゼラチンは、雲母が重要です。商業用ゼラチンは、魚、牛、そして豚を含む脊椎動物の数から絶縁されています。起源と処理方法はどちらも細菌の固定化のためのゼラチンの適合性を決定する。多数の情報源とゼラチンのタイプは固定細菌で、その有効性を?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、生物環境研究局、米国エネルギー省のとバージニア州の連邦保健研究委員会からの助成金によって後援される。オークリッジ国立研究所は、契約番号DE – AC05 – 00OR22725下で米国エネルギー省のためにUT – Battelle氏、LLCによって管理されます。
Materials
| Name | Company | Catalogue number |
| Gelatin | Sigma, St. Louis, MO | G6144, G2625 or G2500 |
| PicoPlus Atomic Force Microscope | Agilent Technologies, Tempe, AZ | |
| AFM cantilevers | Veeco, Santa Barbara, CA | MLCT-AUHW |
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Allison, D. P., Sullivan, C. J., Mortensen, N. P., Retterer, S. T., Doktycz, M. Bacterial Immobilization for Imaging by Atomic Force Microscopy. J. Vis. Exp. (54), e2880, doi:10.3791/2880 (2011).