我々は、最も反射光顕微鏡に合うように設計された低コストの低温ステージの製造を実証する。このラボに構築された極低温ステージには、低温光と低温電子顕微鏡との間の効率的かつ信頼性の相関イメージングを可能にします。
低温光顕微鏡(極低温- LM)のカップリングと低温電子顕微鏡(クライオEM)は、細胞のダイナミクスと超微細構造を理解するための多くの利点をもたらす。最初に、細胞は、両方の技術のためのほぼネイティブ環境で撮像することができます。ガラス化プロセスのために、第二に、サンプルは迅速な物理的な固定化ではなく、ゆっくりと化学的固定によって保持されます。第三に、イメージングはクライオ- LMと低温電子顕微鏡の両方で同一のサンプルは、単一のセルではなく、"代表的サンプル"の比較からのデータの相関関係を提供します。これらの利点は、先行研究から知られているが、相関クライオ- LMと低温電子顕微鏡のままの普及は、適切な極低温光顕微鏡のステージを買うか、または構築の費用と複雑さにも制限がある場合があります。ここでは、アセンブリを示す、と地元のハードウェアとの食料品店で見つけた部品を以下の40ドルで、任意の研究室で作製することができる安価な極低温ステージを使用してください。このクライオ- LMステージは、長作動距離の空気の目標を装備している反射光顕微鏡用に設計されています。相関クライオ- LMと低温電子顕微鏡の研究では、試料の支持体として、カーボンコーティングされた標準の3mmの低温電子顕微鏡のグリッドの使用を適応させる。グリッドにサンプルを吸着した後、サンプルをガラス化して転送する/グリッドを処理するために、以前設定されたプロトコルは、マルチ技術のイメージングを可能にするために続いている。その結果、この設定は、反射光顕微鏡での検査では、凍結水和試料の直接の相関イメージングへのアクセス権を持つことができます。
The authors have nothing to disclose.
著者らはこの研究で使用した酵母株へのアクセスを提供するためのブランドンJ.ジップとKen B.カプランに感謝したい。著者はまた、ビデオ撮影の支援についてはフリオレーニンドミンゲス – ラミレスに感謝する。 JEEは、助成金番号5RC1GM91755からNIHの資金支援を認めている。
Table of specific reagents and equipment:
Name | Company | Catalog # | Comments | Cost |
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1 – 22.86 cm (9″) pie pan with sloped edge | Good Cook | Local grocery store | $4.39 | |
1 – 22.86 cm (9″) cake pan | Good Cook | Local grocery store | $4.93 | |
4 pairs of chopsticks | Local grocery store | $.50 | ||
1 – Great Stuff spray foam | Great Stuff | Local hardware store | $5.98 | |
1 – 4cm x8cm x1cm block of aluminum | Local hardware store or metal scrap yard | $10.00 | ||
5 – #10 1.91 cm (3/4″) flat head slotted bolts w/ nuts | Local hardware store | $0.98 | ||
3 – #4 0.95 cm (3/8″) round slotted bolts w/ nuts | Local hardware store | $0.98 | ||
15 – #10 washers | Local hardware store | $0.98 | ||
2 – transparent plastic clipboards | Local office store | $6.84 | ||
1 – Cryo-EM grid box holder | Ted Pella | 160-41 | N/A | |
1 – Cryo-EM grid box handling rod | Ted Pella | 160-46 | N/A | |
1 – R2/1 holey carbon film, 400-mesh copper cryo-EM support grid | SPI Supplies | 4340C-XA | N/A |
Experimental materials