Injeção intravítrea para o Estabelecimento de Modelo de Doenças Ocular

Summary

Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais para doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo demonstra um protocolo para a injeção intravítrea usando uma seringa de 1ml com vidro pipeta. Dicas úteis sobre como evitar sangramento maciço e danos lentes são dadas.

Abstract

Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais. Ele pode ser usado para estabelecer modelos animais com doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo apresenta como usar ferramentas simples e baratas para terminar o procedimento de injeção intravítrea. Uso de uma seringa de 1 ml, em vez de uma seringa hemilton, é usado. Dicas práticas de como fazer agulhas de injeção apropriada usando pipetas de vidro com pontas perfeitas, e como facilmente se conectar a agulha da seringa com a pipeta de vidro bem juntos, são dadas.

Para realizar uma boa injeção intravítrea, há três aspectos a serem observados: 1) no local da injecção não deve atrapalhar estrutura retina; 2) sangramento devem ser evitados para reduzir o risco de infecção; 3) lente deve ser intocável para evitar a catarata traumática. Em resumo, o ponto mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal. Para evitar a interrupção da retina, a região nasal superior do olho de rato foi escolhido. Além disso, o ponto de punção da agulha estava no planar par, que foi cerca de 1,5 mm do limbo na região do olho de rato. Uma pequena quantidade de vítreo é delicadamente empurrado para fora através do orifício da punção para reduzir a pressão intra-ocular antes da injeção. Com o ângulo de injeção de 45 °, é menos provável de causar catarata traumática no olho do rato, evitando assim complicações relacionadas e influência de fatores lenticular. Nesta operação, não houve corte do músculo conjuntiva ocular e, sem sangramento. Com lesão rápido e menor, uma injeção intravítrea de sucesso pode ser feito em minutos.

A injeção set descritas neste protocolo específico é específico para injeção intravítrea. No entanto, os métodos e materiais aqui apresentados também podem ser usados ​​para outros procedimentos de injecção na entrega da droga para o cérebro, medula espinhal ou em outros órgãos pequenos mamíferos.

Protocol

Prepare as pipetas de vidro usando extrator pipetas, conectá-lo a uma seringa de 1ml, e selar a conexão com parafilme. Retirar 2 ml de solução na ponta das pipetas e prepare-se para a injecção. Anestesiar o rato por injeção intra-peritoneal de cetamina (80mg/kg) e xilazina (8mg/kg) (relação de volume de 2:1). Aplique uma gota de Alcaine 0,5% para os olhos de ratos como anestésicos tópicos antes da injeção intravítrea. Posicione o rato e expor a região nasal superior do olho. Use u…

Discussion

Injeção intravítrea bom é útil para estabelecer um modelo animal, bem como o tratamento intra-ocular directa. Primeiro, no local da injecção não deve perturbar a estrutura retina. Sangramento, segundo devem ser evitados para reduzir o risco de infecção. Lente, o terceiro deve ser intocável para evitar a catarata traumática. O mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Operating Microscope		Olympus	OME
Glass Pipettes		World Precision Instruments, Inc.
Pipette Puller		David Kopf Instruments
1ml syringes				single use
30G needles				single use
Ketamine		Aldasan		anesthetic
Xylazine		Aldasan		anesthetic
Alcaine		Alcon-Couvreur		0.5% proparacaine hydrochloride
Tobrex		Alcon-Couvreur		ointment, 3% tobramyxin.