从人类毛囊神经嵴干细胞的分离和培养的
Summary
本文提出了一种强大的协议从人的头发毛囊的神经嵴干细胞的分离和培养。
Abstract
毛囊进行终身的增长，头发的周期是一个控制的过程，涉及干细胞的增殖和平静。头发隆起是一个很好的成体干细胞的特征利基。这包含了许多不同类型的干细胞，包括上皮干细胞，黑素细胞的干细胞3和神经嵴类似干细胞4-7段的外根鞘。毛囊代表一个可访问的和不同类型的人类干细胞的丰富来源。我们和其他人隔离的神经嵴干细胞（非公务员合约员工）的成人和胎儿毛囊4,5。这些人类干细胞标记的滞留细胞，通过体外细胞不对称分裂，并能够自我更新。他们表示，未成熟的神经嵴细胞的标记物，但不分化标志物。我们的表达谱的研究表明，他们有着相似的基因表达模式与小鼠皮肤未成熟的神经创建ST细胞。它们表现出的克隆的多能在体外克隆单细胞培养后，可以给引起生肌，黑色素细胞和神经元的细胞谱系。分化的细胞，不仅获得了种系特异性标志物，而且在体外条件下表现出适当的功能。此外，这些非公务员合约员工向间充质谱系分化潜能。分化的神经元细胞能坚持在小鼠大脑和保留神经元的分化。它已经表明，毛囊派生的非公务员合约员工可以帮助神经再生，改善运动功能，这些干细胞在小鼠体内移植后，横断性脊髓损伤8。此外，外周神经干细胞移植和植入的皮肤源性坐骨神经神经前体细胞相邻修复，导致髓鞘10。因此，毛囊/皮肤派生的非公务员合约员工已经显示出可喜的结果为r临床前模型egenerative治疗。
体细胞重编程诱导多能干细胞（iPS细胞）已经显示出巨大的潜力，再生医学。不过，也有iPS细胞，特别是基因/病毒整合和潜在的致瘤性多能干细胞的长期影响仍有许多问题没有得到充分解决。还有许多难以克服的障碍前iPS细胞可用于再生医学。鉴于成体干细胞是已知的，是安全的，它们已被用于临床多年，如骨髓移植。很多病人已经从治疗中获益。自体成人干细胞仍然是优选的用于移植细胞。因此，在人的皮肤/头发毛囊容易获得的，可扩展的成体干细胞是再生医学的重要来源。
Protocol
Discussion
细胞的分离和培养方法的重现性和强大的。我们已经生成的非公务员合约员工从几十个人在广泛的年龄范围。虽然这是最好的，处理组织组织收获后，我们发现头皮组织可以安全地存储在媒体上冰过夜运输对细胞活力的影响最小。
重要的是要与抗生素治疗头皮组织和毛囊分离过程中使用无菌技术，以避免潜在的微生物污染。被丢弃的小改款皮肤或胎儿头皮组织的收益率，数?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是支持的NIH授予R01AR054593，和R01AR054593-S1徐。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| DMEM | Invitrogen | 11965-092 |
| DMEM/F12 | Invitrogen | 11330-32 |
| Heat-inactivated FBS | Hyclone | SH30071.03 |
| B27 supplement | Invitrogen | 17504044 |
| N2 supplement | Invitrogen | 17502048 |
| bFGF | Invitrogen | PHG0026 |
| EGF | R&D system | 236-EG-01M |
| IGF-I | R&D system | 291-G1-050 |
| 0.05% Trypsin/EDTA | Invitrogen | 25300-054 |
| Dispase | Invitrogen | 17105041 |
| Penicillin-Streptomycin | Invitrogen | 15070063 |
Table 1.
References
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