Inductie en Monitoring van Adoptieve vertraagd-type overgevoeligheid bij ratten
Summary
Vertraagde type overgevoeligheid (DTH) is een ontstekingsreactie gemedieerd door CCR7-effector-geheugen T (TEM) lymfocyten. Hier laten we zien hoe de antigeen-specifieke TEM-cellen te activeren, te induceren adoptie-DTH bij Lewis ratten en toezicht op de ontstekingsreactie.
Abstract
Vertraagde type overgevoeligheid (DTH) is een ontstekingsreactie gemedieerd door CCR7-effector-geheugen T-lymfocyten die de plaats van de injectie van een antigen waartegen het immuunsysteem is gevuld te infiltreren. De ontstekingsreactie wordt gekenmerkt door roodheid en zwelling van de site van antigene uitdaging. Het is een handig model om vast te stellen de in vivo werkzaamheid van immunosuppressiva. Cutane DTH kan worden geïnduceerd door adoptieve overdracht van antigeen-specifieke T-lymfocyten of door actieve immunisatie met een antigeen, en de daaropvolgende intradermale uitdaging met het antigeen van de ontstekingsreactie in een bepaald huidgebied induceren. DTH reacties kunnen worden veroorzaakt aan verschillende antigenen, zoals ovalbumine, tuberculine, tetanustoxoïd of keyhole limpet hemocyanine. Dergelijke reacties kunnen ook worden geïnduceerd tegen autoantigen, bijvoorbeeld om basic protein (MBP) myeline in ratten met experimentele auto-immune encephalomyelitis geïnduceerd met MBP, een diermodel voor multiple sclerose (1). Hier laten we zien hoe een adoptie-DTH-reactie in Lewis ratten veroorzaken. We zullen eerst stimuleren ovalbumine-specifieke T-cellen in vitro en injecteer deze geactiveerde cellen intraperitoneaal toegediend aan ratten naïef. Na aftrek van de cellen in evenwicht in vivo voor twee dagen, zullen we tegen de ratten met ovalbumine in de oorschelp van een oor, terwijl het andere oor zul ontvangen zoutoplossing. De ontstekingsreactie is zichtbaar 3-72 uur later en oor de dikte wordt gemeten als een indicatie van de DTH ernst.
Protocol
Discussion
De antigene uitdaging kan ook worden uitgevoerd op andere locaties, bijvoorbeeld in de huid van de rug (2). We echter vinden dat een uitdaging. Met behulp van de oorschelp van het oor, zoals in deze video, zorgt voor de meest nauwkeurige meting van de DTH-reactie.
Acknowledgements
Wij danken dr. Alexander Flugel (Martinsried, Duitsland) voor het verstrekken van ons de GFP-gelabelde, ovalbumine-specifieke T-cel lijn die in dit protocol.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco/Invitrogen | 12430-062 | 500ml | |
| Sodium pyruvate | Sigma | S8636 | 1 mM final, in Stimulation medium | |
| Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine | Cambrex/BioWhittaker | 17-718R | 100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium | |
| Non essential amino acids | Sigma | R7131 | NEAA, 1% final, in Stimulation Medium | |
| RPMI vitamins | Sigma | R7256 | 1% final, in Stimulation medium | |
| beta-mercaptoethanol | Sigma | M6250 | 2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium | |
| Syngeneic rat serum | 1% final. See explanation in Protocol. | |||
| Ovalbumin | Sigma | A5503 | 10 µg/ml final, in Stimulation Medium. |
References
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. , 166-936 (2001).
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of active delayed type hypersensitivity (DTH)in rats. J Vis Exp. (5), (2007).
