Verzögerte Überempfindlichkeitsreaktionen (DTH) ist eine entzündliche Reaktion durch CCR7-Effektor-Memory-T (TEM)-Lymphozyten vermittelt. Hier zeigen wir, wie um Antigen-spezifische TEM-Zellen zu aktivieren, bewegen Adoptiveltern DTH in Lewis-Ratten und überwachen die entzündliche Reaktion.
Abstract
Verzögerte Überempfindlichkeitsreaktionen (DTH) ist eine entzündliche Reaktion durch CCR7-Effektor-Memory-T-Lymphozyten, dass der Injektionsstelle eines Antigens, gegen die das Immunsystem grundiert hat infiltrieren vermittelt. Die Entzündungsreaktion wird durch Rötung und Schwellung der Website von antigenen Herausforderung geprägt. Es ist eine bequeme Modell, um die in vivo Wirksamkeit von Immunsuppressiva zu bestimmen. Kutane DTH kann entweder durch adoptiven Transfer von Antigen-spezifischen T-Lymphozyten oder durch aktive Immunisierung mit einem Antigen, und die anschließende intradermal Herausforderung mit dem Antigen auf die entzündliche Reaktion in einem bestimmten Hautareal hervorrufen induziert werden. DTH-Reaktionen können auf verschiedene Antigene hervorgerufen werden, z. B. Ovalbumin, Tuberkulin-, Tetanus-Toxoid, oder Keyhole Limpet Hämocyanin. Solche Reaktionen können auch gegen Autoantigen induziert werden, zum Beispiel um basisches Protein (MBP) in Ratten, die mit experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis induziert mit MBP, einem Tiermodell für Multiple Sklerose (1) Myelin. Hier zeigen wir, wie ein Adoptiv-DTH-Reaktion in Lewis-Ratten zu induzieren. Wir werden zunächst zu stimulieren Ovalbumin-spezifischen T-Zellen in vitro und injizieren diese aktivierten Zellen intraperitoneal naive Ratten. Nachdem die Zellen in vivo für 2 Tage ins Gleichgewicht, werden wir die Ratten mit Ovalbumin in der Ohrmuschel eines Ohres Herausforderung, während das andere Ohr wil erhalten Kochsalzlösung. Die entzündliche Reaktion sichtbar sein wird 3-72 Stunden später und die Dicke der Ohren wird als Indiz für DTH Schwere gemessen werden.
Protocol
1. Die Stimulation der Ovalbumin-spezifischen T-Lymphozyten Ruhe-Ovalbumin-spezifischen T-Zellen sind mit Ovalbumin in Gegenwart von bestrahlten Lewis Ratten-Thymozyten (30 Gy) als Antigen-präsentierende Zellen (APC), in Stimulation Medium (Prepare in DMEM + Pen / Strep / L-Glut + + NEAA RPMI Vitamine angeregt + + 2ME Rattenserum + Ovalbumin, die Endkonzentrationen bemerkt in der Stückliste.) Rattenserum Vorbereitung Wir nehmen Serum von Ratten wir als …
Discussion
Die antigene Herausforderung kann auch an anderen Standorten durchgeführt werden, zum Beispiel in der Haut des Rückens (2). Wir finden jedoch, dass eine Herausforderung. Mit der Ohrmuschel, wie in diesem Video gezeigt, ermöglicht die präzise Messung der DTH-Reaktion.
Acknowledgements
Wir danken Dr. Alexander Flügel (Martinsried, Deutschland) für die Bereitstellung der GFP-markierten, Ovalbumin-spezifischen T-Zell-Linie in diesem Protokoll verwendet.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
DMEM
Gibco/Invitrogen
12430-062
500ml
Sodium pyruvate
Sigma
S8636
1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine
Cambrex/BioWhittaker
17-718R
100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium