Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T (TEM) lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada, antijen spesifik TEM hücreleri aktive Lewis sıçanlarda evlatlık DTH neden ve inflamatuar yanıt izlemek nasıl göstermektedir.
Abstract
Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH), bağışıklık sisteminin astarlanmalıdır karşı antijen enjeksiyonu site sızmaya CCR7 efektör bellek T lenfositleri aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyondur. Inflamatuar reaksiyon antijenik meydan yerinde kızarıklık ve şişme ile karakterize edilir. Immunsupresanların in vivo etkinliğini belirlemek için uygun bir model. Kutanöz DTH, antijen-spesifik T lenfositlerin evlatlık havalesi ile veya antijen ile aktif bağışıklama ve inflamatuar reaksiyon, belirli bir cilde alanda ikna etmek için antijen ile daha sonraki intradermal meydan tarafından başlatılabilir. DTH yanıtları örnek ovalbumin, tüberkülin, tetanoz toksoidi ya da anahtar deliği limpet hemosiyanin için, çeşitli antijenleri ikna olabilir. Bu tür reaksiyonlar da MBP, multipl skleroz (1) için bir hayvan modeli olan deneysel otoimmün ensefalomyelit indüklenen sıçan miyelin bazik protein (MBP), örneğin, otoantijen karşı tetiklenen olabilir. Burada nasıl ikna etmek için Lewis sıçanlarda bir evlatlık DTH reaksiyon göstermektedir. Biz ilk kez in vitro ovalbumin-spesifik T hücreleri uyarmak ve naif sıçanlarda bu aktive hücrelerinin intraperitoneal enjekte. Hücreleri, 2 gün boyunca in vivo olarak dengelenmesi için izin sonra, diğer kulak wil tuzlu alırken, fareler bir kulak kepçesi ovalbuminspesifik ile meydan okuyacak. Inflamatuar reaksiyon 3-72 saat sonra görülebilir ve kulak kalınlığı DTH şiddetinin bir göstergesi olarak ölçülen olacak.
Protocol
1. Ovalbumin-spesifik T lenfositlerin uyarılması Dinlenme ovalbumin-spesifik T hücreleri, antijen sunan hücreler (APC) olarak Uyarım Orta ışınlanmış Lewis sıçan timositleri (30 Gy), (DMEM + Pen / Strep / L-Glut + NEAA + RPMI Vitaminler hazırlanın varlığı ovalbumin ile uyarılan + 2ME + Rat Serum + ovalbumin final konsantrasyonlarda malzeme listesinde kaydetti.) Sıçan serum hazırlık Biz timus vericisi olarak kurban sıçanlarda serum a…
Discussion
Antijenik meydan aynı zamanda, arka (2) cilt örneğin, diğer sitelerde de yapılabilir. Ancak bu zorlu bulabilirsiniz. Bu videoda gösterildiği gibi kulak kepçesi, DTH reaksiyon en hassas ölçüm için izin verir.
Acknowledgements
Biz bu protokolü kullanılan GFP etiketli ovalbumin-spesifik T hücre hattı bize sağlamak için Dr. Alexander Flügel (Martinsried Almanya) teşekkür ederim.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
DMEM
Gibco/Invitrogen
12430-062
500ml
Sodium pyruvate
Sigma
S8636
1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine
Cambrex/BioWhittaker
17-718R
100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium