Induktion och övervakning av Adoptivföräldrar fördröjd hypersensitivitet hos råttor

Summary

Fördröjd överkänslighet (DTH) är en inflammatorisk reaktion medierad av CCR7-effektor minne T (TEM) lymfocyter. Här visar vi hur du aktiverar antigenspecifika TEM celler inducerar adoptiv DTH i Lewis råttor och övervaka det inflammatoriska svaret.

Abstract

Fördröjd överkänslighet (DTH) är en inflammatorisk reaktion medierad av CCR7-effektor lymfocyter minne T som infiltrerar injektionsstället av ett antigen mot vilket immunförsvaret har primade. Den inflammatoriska reaktionen kännetecknas av rodnad och svullnad på platsen antigena utmaning. Det är en praktisk modell för att bestämma in vivo-effekten av immunosuppressiva medel. Kutan DTH kan induceras antingen genom adoptiv transfer av antigen-specifika T-lymfocyter eller genom aktiv immunisering med ett antigen, och efterföljande intradermalt utmaning med det antigen att framkalla den inflammatoriska reaktionen i ett visst hudområde. DTH svar kan förmås att olika antigener, t.ex. äggalbumin, tuberkulin, stelkramp, eller nyckelhål ostronpest hemocyanin. Sådana reaktioner kan också orsakas mot autoantigen, till exempel för att myelin grundläggande protein (MBP) hos råttor med experimentell autoimmun encefalomyelit inducerad med MBP, en djurmodell för multipel skleros (1). Här kan vi visa hur man framkalla en adoptiv DTH reaktion i Lewis råttor. Vi kommer först att stimulera äggalbumin-specifika T-celler in vitro och injicera dessa aktiverade celler intraperitonealt till naiva råttor. Efter att låta cellerna att jämvikt in vivo för 2 dagar, kommer vi att utmana råttor med äggalbumin i ytterörat av ett öra, medan det andra örat wil får saltlösning. Den inflammatoriska reaktionen kommer att vara synlig 3-72 timmar senare och örat tjocklek kommer att mätas som en indikation på DTH svårighetsgrad.

Protocol

1. Stimulering av äggalbumin-specifika T-lymfocyter Vilande äggalbumin-specifika T-celler stimuleras med äggalbumin i närvaro av bestrålade Lewis råtta tymocyter (30 Gy) som antigen presenterande celler (APC), i stimulering Medium (Förbered i DMEM + Penna / Strep / L-glut + NEAA + RPMI Vitaminer + 2ME + Rat serum + äggalbumin, vid den slutliga koncentrationer noterades i materialet listan.) Rat serum beredning Vi tar serum från råttorna vi offer…

Discussion

Den antigen Utmaningen kan också utföras på andra platser, till exempel i huden på ryggen (2). Vi finner dock att utmanande. Med hjälp av ytterörat av örat, som visas i denna video, möjliggör den mest exakta mätningen av DTH-reaktionen.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Gibco/Invitrogen	12430-062	500ml
Sodium pyruvate		Sigma	S8636	1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine		Cambrex/BioWhittaker	17-718R	100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium
Non essential amino acids		Sigma	R7131	NEAA, 1% final, in Stimulation Medium
RPMI vitamins		Sigma	R7256	1% final, in Stimulation medium
beta-mercaptoethanol		Sigma	M6250	2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium
Syngeneic rat serum				1% final. See explanation in Protocol.
Ovalbumin		Sigma	A5503	10 µg/ml final, in Stimulation Medium.