Indução e Monitoramento de hipersensibilidade tardia-Type Adoptive em Ratos

Summary

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por CCR7-efetoras de memória T (TEM) linfócitos. Aqui demonstramos como ativar células antígeno-específicas TEM, induzir DTH adotivos em ratos Lewis e monitorar a resposta inflamatória.

Abstract

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por linfócitos efetores CCR7-T de memória que infiltram o local da injeção de um antígeno contra o qual o sistema imunológico tem sido preparado. A reação inflamatória é caracterizada por vermelhidão e inchaço do local de desafio antigênico. É um modelo conveniente para determinar a eficácia in vivo de imunossupressores. DTH cutânea pode ser induzida ou por transferência adotiva de linfócitos T antígeno-específicos ou por imunização ativa com um antígeno e subseqüente desafio intradérmico com o antígeno para induzir a reação inflamatória da pele em uma área determinada. Respostas DTH pode ser induzida a vários antígenos, para a ovalbumina exemplo, a tuberculina, toxóide tetânico, ou hemocianina limpet buraco da fechadura. Tais reações também pode ser induzida contra autoantígeno, por exemplo, para proteína básica da mielina (MBP) em ratos com encefalomielite auto-imune experimental induzida com MBP, um modelo animal para a esclerose múltipla (1). Aqui demonstramos como para induzir uma reação adotivos DTH em ratos Lewis. Vamos primeiro estimulam as células T específicas ovalbumina in vitro e injetar essas células ativadas por via intraperitoneal em ratos ingênuos. Depois de permitir que as células para equilibrar in vivo por 2 dias, vamos desafiar os ratos com ovalbumina no pavilhão auricular de uma orelha, enquanto a outra orelha wil receber solução salina. A reação inflamatória será visível 3-72 horas depois e espessura de ouvido será medido como uma indicação da gravidade da DTH.

Protocol

1. Estimulação dos linfócitos T específicos ovalbumina Descansando células ovalbumina específico T são estimuladas com ovalbumina na presença de ratos irradiados timócitos Lewis (30 Gy) como células apresentadoras de antígenos (APCs), no Médio Estimulação (Prepare em DMEM + Pen / Strep / L-Glut + + NEAA RPMI Vitaminas + + 2ME Rat Serum + ovalbumina, nas concentrações finais observou na lista de materiais.) Preparação do soro de ratos Tom…

Discussion

O desafio antigênico também pode ser realizada em outros locais, por exemplo, na pele do dorso (2). Nós, no entanto descobrir que um desafio. Usando o pavilhão da orelha, como mostra este vídeo, permite a medição mais precisa da reação DTH.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Gibco/Invitrogen	12430-062	500ml
Sodium pyruvate		Sigma	S8636	1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine		Cambrex/BioWhittaker	17-718R	100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium
Non essential amino acids		Sigma	R7131	NEAA, 1% final, in Stimulation Medium
RPMI vitamins		Sigma	R7256	1% final, in Stimulation medium
beta-mercaptoethanol		Sigma	M6250	2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium
Syngeneic rat serum				1% final. See explanation in Protocol.
Ovalbumin		Sigma	A5503	10 µg/ml final, in Stimulation Medium.