体外拟态正常与异常的人造血
Summary
用脐血及白血病骨髓细胞三维培养一种造血系统。该方法的基础上使用涂有细胞外基质蛋白合成的多孔聚氨酯脚手架。这种支架是适应能力，以适应广泛的细胞。
Abstract
造血干细胞需要一个独特的微环境，以维持血细胞的形成1;骨髓（BM）是一个复杂的三维（3D）组织其中造血称为壁龛2-4空间组织的细胞微环境监管。该组织的骨髓龛是正常或恶性骨髓5的功能或功能障碍的关键。因此， 在使用前体内模仿体内微的更好的理解，将有助于我们澄清6白血病的分子，细胞和微环境因素。
目前，造血干细胞在体外培养中的二维（2D）的组织培养瓶/要求要么与异体或异种基质细胞共培养或添加外源性细胞因子8孔板7。这些条件是人工从体内不同</eM>微环境中，他们缺乏的三维细胞龛和揭露细胞，细胞因子浓度异常高，这可能会导致分化和全能性9,10损失。
在此，我们提出了一种新的三维骨髓培养系统，模拟在体内的三维生长环境，在缺乏外源性生长因子，并支持多向造血。在聚氨酯（PU）制成的这种系统使用的脚手架高度多孔促进高密度，跨越更高的比表面积比传统2D 11单层培养细胞的生长。我们的工作表明，该模型支持脐血（CB）的单核细胞（MNC）的12和外源性细胞因子的情况下，在原代白血病细胞的生长。这种新颖的3D模仿一个人的实验模型，研究造血和探索新的治疗白血病的发展提供了一个可行的平台。
Protocol
Discussion
这里介绍的体外三维培养系统使我们能够建立一个造血的三维仿生概括了原始的BM结构和独立外源性细胞因子的细胞表型。三维模型提供的结构和微环境，使正常和异常造血细胞的增殖在体内遇到类似的条件。
聚合物支架材料的选择代表了仿生学设计的关键步骤。生物材料中重要的优势，已导致越来越大的兴趣在聚合物模仿体内环境提供所需的建筑，结构…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由理查德·托马斯白血病基金，塔塔纪念夫人信托，Northwick公园医院白血病研究信托基金和美国国立卫生研究院研究所（NIHR），英国。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue No |
| Dioxan | Invitrogen | D20,186-3 |
| PBS | Gibco | 14190-094 |
| IMDM | Invitrogen | 12440-053 |
| Ficoll-Paque | GE Healthcare | 17-1440-02 |
| Penicillin/Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 |
| MTS | Promega | G3580 |
| Glutaraldehyde | Fluka Biochemika | 49624 |
| Wright-Giemsa | Sigma-Aldrich | WG32 |
| Fetal bovine serum | Gibco | 10108-165 |
| CD71 | Santa Cruz Biotechnology | sc-32272 |
| Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11001 |
| CD45-FITC | BD Pharmigen | 74895 |
| CD71-PE | BD Pharmigen | 555537 |
| CD235a-PE-Cy5 | BD Pharmigen | 555570 |
| Sodium azide | Sigma-Aldrich | S-8032 |
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