Mesure de la pression ventriculaire gauche à la fin de souris embryonnaires et néonatale
Summary
Mesure de la pression ventriculaire gauche (VG) chez la souris embryonnaires et néonatale est décrite. La pression est mesurée par l'insertion d'une aiguille reliée à un transducteur à remplissage de fluide dans le BT sous échographie. Des précautions doivent être prises pour maintenir une fonction cardiaque normale au cours du protocole expérimental.
Abstract
La pression artérielle augmente de façon significative au cours du développement embryonnaire et postnatal chez les animaux vertébrés. Chez la souris, le débit sanguin est le premier détectable autour du jour embryonnaire (E) 8.5 1. Systolique ventriculaire gauche (VG) la pression est de 2 mmHg à 11 mmHg et E9.5 à E14.5 2. A ces stades la mi-embryonnaires, le LV est clairement visible à travers la paroi thoracique pour les mesures de pression invasive parce que les nervures et la peau ne sont pas pleinement développés. Entre E14.5 et la naissance (environ E21) des méthodes d'imagerie doit être utilisée pour afficher le LV. Après la naissance, des augmentations moyennes de pression artérielle de 30 à 70 mmHg au jour postnatal (P) 2 – 35 3. Au-delà de P20, la pression artérielle peut être mesurée avec l'état solide (c.-à-cathéters Millar ou SCISENSE). Avant P20, ces cathéters sont trop gros pour développer les artères de souris et de la pression artérielle doit être mesurée à l'aide personnalisée tiré cathéters en plastique attachés à des transducteurs de pression remplis de liquide ou de verre 3 micropipettes attsouffrait d'asservissement des transducteurs de pression nulles 4.
Nos travaux récents ont montré que la plus forte augmentation de la pression artérielle se produit pendant les embryonnaire fin à la période postnatale précoce chez la souris 5-7. Cette forte augmentation de la pression artérielle peuvent influer sur des cellules musculaires lisses (SMC) phénotype dans les artères en développement et déclencher des événements importants mécanotransduction. Dans la maladie humaine, où les propriétés mécaniques des artères en voie de développement sont compromis par des défauts dans les protéines de la matrice extracellulaire (syndrome c.-à-Marfan 8 et une sténose aortique supravalvulaire 9) les changements rapides de la pression artérielle au cours de cette période peut contribuer à phénotype de la maladie et la gravité par des altérations dans la mécanotransduction signaux. Par conséquent, il est important de pouvoir mesurer les changements de pression artérielle au cours de la fin embryonnaire et la période néonatale dans des modèles murins de maladies humaines.
Nous décrivons une méthode pour mesurer la pression à la fin de LVembryonnaire (E18) et au début du post-natal (P1 – 20) chez la souris. Une aiguille attachée à un transducteur de pression remplie de fluide est insérée dans le LV sous échographie. On prend soin de maintenir une fonction cardiaque normale au cours du protocole expérimental, en particulier pour les souris embryonnaires. Les données représentatives sont présentées et les limites du protocole sont discutés.
Protocol
Discussion
Le protocole présenté ici fournit une méthode pour mesurer la pression dans le LV embryonnaire fin et au début des souriceaux nouveau-nés. La principale limitation de ce protocole est la résolution temporelle de la pression du système. Le signal de pression est amorti lorsqu'il se déplace de la LV à travers l'aiguille au transducteur, et que les valeurs moyennes de pression peut être enregistrée. L'amortissement peut être minimisé en utilisant la plus grande aiguille possible, mais l'aiguill…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été financé, en partie, par des subventions du NIH et HL087653 HL105314. Certaines de ces méthodes ont été développées dans le laboratoire du Dr Robert Mecham à l'École de médecine de l'Université de Washington.
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| High resolution ultrasound system | Visualsonics | Vevo 770 | Or other appropriate ultrasound system |
| High frequency ultrasound probes | Visualsonics | 708 and 707B | |
| Imaging platform and injection arm | Visualsonics | Imaging Station 2 | With ECG and temperature feedback control of platform |
| Pressure transducer | AD Instruments | MLT 844 | |
| Bridge amplifier | AD Instruments | ML221 | |
| Data acquisition system | AD Instruments | ML866 | |
| Data recording software | AD Instruments | LabChart | |
| Ring stand and clamp | Various suppliers | To hold pressure transducer during measurements | |
| 3-way stopcocks with luer connections, male lock | Cole Parmer | 30600-02 | |
| 1/16″ ID Tygon Tubing | Cole Parmer | 06408 | |
| Male and female luers w/ 1/16″ hose barb | Cole Parmer | 45510-50 45510-00 | |
| 24″ tubing with male and female luer at each end | Cole Parmer | 30600-60 | |
| 3 and 10 mL syringes | BD Biosciences | ||
| 30 and 25G needles | BD Biosciences | 1.5 inches in length | |
| Big Ben manometer | Riester | 1456-100 | |
| Saline | Various suppliers | ||
| Heparin | Various suppliers | ||
| Ultrasound gel | Parker | Aquasonic 100 | |
| Hair remover lotion | Nair |
References
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