Una técnica simplificada para<em> In situ</em> La escisión de la Córnea y la evisceración del tejido de la retina del globo ocular humano

Summary

El artículo describe una técnica simplificada para extirpar la córnea y la retina para destripar los tejidos del globo ocular de donantes cadavéricos humanos. La técnica descrita aquí ayudará a tejidos especiales de buena calidad para ser utilizadas para el trasplante, con fines quirúrgicos o de investigación, sin dañar otros tejidos del globo ocular.

Abstract

La enucleación es el proceso de recuperar el globo ocular de un donante cadáver, dejando el resto del mundo sin ser molestados. La escisión se refiere a la recuperación de los tejidos oculares, especialmente la córnea, cortándolo separado del globo ocular. La evisceración es el proceso de eliminación de los órganos internos a que se refiere aquí como la retina. El globo ocular está formado por la córnea, la esclera, el cuerpo vítreo, el cristalino, el iris, la retina, la coroides, etc músculos (Figura Suplemento 1). Cuando un paciente sufre de daños en la córnea, la córnea debe ser eliminado y una sana debe ser trasplantados por cirugías queratoplástico. Los trastornos genéticos o defectos en la función retiniana puede comprometer la visión. Globos oculares humanos puede ser utilizado para diversos procedimientos quirúrgicos, como la banca del ojo, el trasplante de córnea humana o de la esclerótica y la investigación sobre los tejidos oculares. Sin embargo, existe poca información disponible sobre la escisión humana la córnea y la retina, probablemente debido a la laccesibilidad imited a los tejidos humanos. La mayoría de los estudios que describen procedimientos similares se realizan en modelos animales. Los investigadores científicos se basan en la disponibilidad de los tejidos oculares correctamente disecados y bien conservada con el fin de ampliar el conocimiento sobre el desarrollo humano los ojos, la homeostasis y la función. Al recibir gran cantidad de globos oculares fuera de las cuales aproximadamente el 40% (Tabla 1) de ellos se utilizan con fines de investigación, que son capaces de realizar gran cantidad de experimentos en estos tejidos, la definición de las técnicas de los impuestos especiales y preservar de forma regular.

La córnea es un tejido avascular que permite la transmisión de luz en la retina y para este propósito debe mantener siempre un buen grado de transparencia. Dentro de la córnea, la región limbo, que es un depósito de las células madre, ayuda a la reconstrucción de las células epiteliales y restringe el sobrecrecimiento de la conjuntiva mantener la transparencia corneal y la claridad. El tamaño y TH ickness de la córnea son fundamentales para la visión clara, como los cambios en cualquiera de ellos podría dar lugar a distraerse, visión borrosa. La córnea comprende de 5 capas; una) epitelio, b) la membrana de Bowman, c), estroma, d), la membrana de Descemet y e) endotelio. Todas las capas deben funcionar adecuadamente para garantizar una visión clara ^4,5,6. La coroides es la túnica intermedia entre la esclerótica y la retina, limita al interior por la membrana de Bruch y es responsable del flujo de sangre en el ojo. El coroides también ayuda a regular la temperatura alimento y suministros a las capas externas de la retina ^5,6. La retina es una capa de tejido nervioso que cubre la parte posterior del globo ocular (Figura Supl. 1) y consta de dos partes: una parte fotorreceptora y una parte no receptiva. La retina ayuda a recibir la luz de la córnea y el cristalino y la convierte en la energía química eventualmente en el cerebro con la ayuda del nervio óptico ^5,6.

ove_content "> El objetivo de este documento es proporcionar un protocolo para la disección de los tejidos de la córnea y la retina de los globos oculares humanos. Evitar la contaminación cruzada con los tejidos adyacentes y la preservación de la integridad del ARN es de una importancia fundamental como tales tejidos son indispensables para fines de investigación dirigidos en (i) la caracterización del transcriptoma de los tejidos oculares, (ii) el aislamiento de células madre para los proyectos de medicina regenerativa, y (iii) la evaluación de las diferencias histológicas entre los tejidos normales del / los sujetos afectados. En este trabajo se describe la técnica que actualmente se utiliza para eliminar la córnea, la coroides, la retina y los tejidos de un globo ocular. A continuación presentamos un protocolo detallado para la disección del globo ocular humano y la escisión de tejidos de la córnea y la retina. El vídeo que acompaña ayudará a los investigadores a aprender una técnica apropiada para la recuperación de preciosos tejidos humanos que son difíciles de encontrar regularmente.

Protocol

1. En escisión in situ de la córnea a partir de globos oculares Conectar la campana de flujo laminar de aire de aproximadamente 15 minutos antes de su uso. Limpie la campana de flujo laminar utilizando el 70% de alcohol isopropílico. Ponga en la ropa de protección personal como gorro quirúrgico y la máscara. Frote las manos y los antebrazos y seque con una toalla estéril. Use guantes estériles y bata o mangas utilizando una técnica aséptica. Configure el campo estéril, c…

Discussion

Ambos, la escisión correcta y adecuada conservación de los tejidos de la córnea y la retina son críticos, como los defectos de menor importancia tales como el daño endotelial o elevado número de pliegues de Descemet puede conducir al fracaso del injerto de córnea, mientras que las alteraciones de temperatura o mal manejo puede poner en peligro la integridad de los tejidos retina. El objetivo de este trabajo es mostrar cómo los tejidos corneales y retinianas se pueden aislar de manera óptima, sin provocar daños…

Materials

Materials for excision of cornea and retina.

Product description	Dimensions	Company / Institute
Guarded disposable scalpel	Blade size 15	Swann-Morton
Sterile bandages	5 cm X 5 cm, 8 layered, 5 pcs	Artsana
Sterile disposable medical towel	35 X 50 cm	U.Jet
Sterile scissors	Blades 24 mm / overall length. 95 mm curved, blunt	e.janach
Sterile forceps	Stainless steel -100 mm 11 X 2 ruled by 0.70 mm teeth	e.janach
Corneal claw – Disposable medical device		NIIOS (Hippocratech)
	Preparations
PBS	100 ml PBS [10x] in 900 ml d/w (distilled water)	Sigma-Aldrich
Na-thiosulphate	1 gm Na-thiosulphate in 1 litre of PBS [1x]	Sigma-Aldrich
I-PVP	5 gm I-PVP in 1 litre d/w	Sigma-Aldrich

Table 2. The table describes the materials used for excision of cornea and retina and the company they are received from.

Materials for storage medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1900 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10ml/l)	20 ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10ml/l)	20 ml
Antibiotic/antimycotic	Sigma-aldrich	A5955-20ML	10ml/l	20 ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml

Table 3. Materials for storage medium.

Preparation of storage medium

Add all the ingredients using the specific concentrations as given above in a jar and mix well. Filter them using pore size of 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) with help of a peristaltic pump. Preserve the medium in the bottles at RT.

Materials for transport medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1800 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10 ml/l)	20ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10 ml/l)	20ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml
Dextran t500	Pharmacosmos	551005004007	6% (60 gm/litre)	120 g/l

Table 4. Material for transport medium.

Preparation of transport medium

Add Dextran 6% in ~ 1.5 litre of MEM and leave it overnight. Add the rest of ingredients in the media and filter using 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) using a vacuum pump. Preserve the medium in the bottles at RT.