合成的<em>在体内</em> MRI检测细胞凋亡的探讨
Summary
细胞凋亡的早期检测可以识别处于危险的细胞群，在多种疾病。在这里，我们展示了一个方法来链接早期凋亡检测蛋白Annexin V的一个MRI检测的氧化铁纳米粒子（超顺磁性氧化铁）。此方法可扩展到其他感兴趣的蛋白质生成MRI检测的分子成像探针。
Abstract
细胞凋亡是许多疾病的显着特征，这一程序性细胞死亡之前，通常会发生疾病的临床表现是显而易见的。在其最早的，可逆的阶段检测细胞凋亡的一种手段，将承担临床前的'窗口'，预防或治疗措施，在此期间，可以采取保护心脏的永久性损伤。这里我们提出一个简单和可靠的方法，共轭人Annexin V的（ANX），如饥似渴地结合到细胞中最早的，可逆的凋亡阶段，超顺磁性氧化铁（SPIO）纳米粒子，作为检测的MRI造影剂。共轭方法开始的超顺磁性氧化铁纳米粒子，氧化成羧基的超顺磁性氧化铁多糖壳的氧化。纯化蛋白ANX，然后添加一个硼酸钠溶液，以方便与超顺磁性氧化铁在ANX共价相互作用，减少缓冲区的设置。一个与钠borohydrid最后削减步骤e是执行完成减少，然后淬火反应。未结合ANX从离心过滤组合。动态光散射（DLS）的大小和ANX-超顺磁性氧化铁产品纯度验证。这种方法并不需要，或修改，超顺磁性氧化铁壳多糖，反对交联氧化铁粒子共轭方法或生物素标记的纳米粒子。因此，这种方法代表了一个简单，可靠的方法，可以延长至共轭利益的其他蛋白质。
Protocol
Discussion
连接超顺磁性氧化铁Annexin V的共轭方法利用膜联蛋白的侧链胺组和超顺磁性氧化铁纳米粒子的羧基基团。通过特定的氧化还原步骤，这些化合物的共价键可以实现，产生的功能化纳米粒子可以被孤立。此法可推广到其他蛋白质与纳米粒子的利益。
最关键的步骤是氧化还原条件，在适当的温度和温和搅拌。产量低，可能会导致不完全氧化或减少，导致无残留Annexin V的，在过滤?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
国家机构的健康，NHLBI（市，PY，PS）。
美国心脏协会（巨浪）。
斯坦福大学，VPUE格兰特（巨浪）。
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue # |
| Superparamagnetic iron oxide | Ocean Nanotech, Inc. | ICK-40-005 |
| Doxorubicin | Sigma | D1515-10MG |
| SuperMag Separator | Ocean Nanotech, Inc. | N/A |
| Zetasizer Nano DLS machine | Malvern, Inc | N/A |
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