एक के संश्लेषण<em> Vivo में</em> Apoptosis एमआरआई detectable जांच
Summary
रोगों की एक किस्म में apoptosis का जल्दी पता लगाने पर जोखिम सेल आबादी की पहचान कर सकते हैं. यहाँ हम एक विधि लोहा एमआरआई detectable आक्साइड nanoparticle (SPIO) के लिए एक प्रारंभिक apoptosis को पहचान प्रोटीन (Annexin वी) लिंक प्रदर्शित करता है. इस विधि को एमआरआई detectable आणविक इमेजिंग जांच उत्पन्न करने के लिए ब्याज की अन्य प्रोटीन के लिए बढ़ाया जा सकता है.
Abstract
सेलुलर apoptosis कई बीमारियों की एक प्रमुख विशेषता है, और इस क्रमादेशित कोशिका मृत्यु आमतौर पर तब होता है से पहले रोग के नैदानिक अभिव्यक्तियाँ स्पष्ट कर रहे हैं. जल्द से जल्द अपने, पलटवाँ चरणों में apoptosis का पता लगाने का मतलब एक पूर्व नैदानिक 'विंडो' के दौरान जो निवारक या उपचारात्मक उपायों के लिए स्थायी क्षति से हृदय की रक्षा के लिए ले जाया जा सकता है नहीं होगा. हम यहाँ एक सरल और मजबूत superparamagnetic लोहे के आक्साइड (SPIO) नैनोकणों, जो एक एमआरआई detectable विपरीत एजेंट के रूप में सेवा करने के लिए मानव Annexin (ANX) वी, जो उत्सुकतापूर्वक apoptosis की जल्द से जल्द, पलटवाँ चरणों में कोशिकाओं को बांधता संयुग्म विधि प्रस्तुत करते हैं. विकार विधि नैनोकणों SPIO, है जो polysaccharide खोल SPIO carboxyl समूहों ऑक्सीकरण ऑक्सीकरण के साथ शुरू होता है. शुद्ध ANX प्रोटीन तो एक सोडियम borate समाधान के एक कम करने के बफर में SPIO साथ ANX के सहसंयोजक बातचीत की सुविधा के लिए सेटिंग में जोड़ा जाता है. , सोडियम borohydrid के साथ एक अंतिम कमी कदमई कमी को पूरा किया जाता है, और तब प्रतिक्रिया बुझती है. Unconjugated ANX microcentrifuge निस्पंदन द्वारा मिश्रण से निकाल दिया जाता है. और ANX – SPIO उत्पाद का आकार और पवित्रता गतिशील प्रकाश बिखरने (DLS) द्वारा सत्यापित है. इस विधि के अलावा, या संशोधन की आवश्यकता नहीं है, polysaccharide SPIO खोल, के रूप में पार से जुड़े लोहे के आक्साइड के कण विकार तरीकों या बायोटिन लेबल नैनोकणों के लिए विरोध किया. एक परिणाम के रूप में, इस विधि का एक सरल, मजबूत दृष्टिकोण है कि ब्याज की अन्य प्रोटीन के संयोजन के लिए बढ़ाया जा सकता है का प्रतिनिधित्व करता है.
Protocol
Discussion
वर्णित Annexin वि SPIO जोड़ने के लिए संयुग्मन विधि Annexin की ओर श्रृंखला amine समूहों और SPIO nanoparticle की carboxyl moieties के कारनामे. विशिष्ट ऑक्सीकरण में कमी कदम के माध्यम से, इन यौगिकों के सहसंयोजक उठाना, प्राप्त किया जा सकता है और ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
(आरडी, PY, पी एस) के राष्ट्रीय संस्थानों स्वास्थ्य NHLBI.
अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन (जीएल).
स्टैनफोर्ड विश्वविद्यालय, VPUE अनुदान (जीएल).
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue # |
| Superparamagnetic iron oxide | Ocean Nanotech, Inc. | ICK-40-005 |
| Doxorubicin | Sigma | D1515-10MG |
| SuperMag Separator | Ocean Nanotech, Inc. | N/A |
| Zetasizer Nano DLS machine | Malvern, Inc | N/A |
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