Summary

Preparación de las rebanadas parasagitales para la Investigación de dorsal-ventral Organización de los roedores de corteza entorrinal medial

Published: March 28, 2012
doi:

Summary

Se describen los procedimientos para la preparación y registro electrofisiológico de rodajas de cerebro que mantienen el eje dorsal-ventral medial de la corteza entorrinal (MEC). Debido a que la codificación neural de la localización sigue una organización dorsal-ventral en el MEC, estos procedimientos de facilitar la investigación de los mecanismos celulares importantes para la navegación y la memoria.

Abstract

Ciencia de la Computación en el cerebro se basa en las neuronas que responden adecuadamente a las entradas sinápticas. Las neuronas se diferencian en su complemento y la distribución de los canales iónicos de membrana que determinan la forma en que responden a las entradas sinápticas. Sin embargo, la relación entre estas propiedades y función celular neuronal en animales de comportarse no se entiende bien. Una aproximación a este problema consiste en investigar topográficamente organizadas circuitos neuronales en el que la posición de los mapas de neuronas individuales en la información que codificar o cálculos que llevan a cabo 1. Los experimentos con este enfoque sugiere principios para el ajuste de las respuestas sinápticas que subyacen a la codificación de información en los circuitos sensoriales y cognitivas 2,3.

La organización topográfica de las representaciones espaciales a lo largo del eje dorsal-ventral medial de la corteza entorrinal (MEC) ofrece una oportunidad para establecer relaciones entre los mecanismos celulares y cálculos importante para la cognición espacial. Las neuronas de la capa II del MEC roedores codificar la localización del uso de la red-como disparar los campos 6.4. Para las neuronas que se encuentran en posiciones dorsal en el MEC la distancia entre los campos de tiro individuales que forman una rejilla es del orden de 30 cm, mientras que para las neuronas en las posiciones progresivamente más ventral esta distancia aumenta hasta más de 1 m. Varios estudios han revelado las propiedades celulares de las neuronas en la capa II del MEC que, como la separación entre los campos de la rejilla de cocción, también se diferencian de acuerdo a su posición dorsal-ventral, lo que sugiere que estas propiedades celulares son importantes para el cálculo espacial 2,7-10.

Aquí se describen los procedimientos para la preparación y registro electrofisiológico de rodajas de cerebro que mantienen la medida de dorsal-ventral de la investigación MEC habilitación de la organización topográfica de las propiedades biofísicas y anatómico de las neuronas del MEC. La posición dorso-ventral del n identificadoseurons en relación con puntos de referencia anatómicos es difícil establecer con precisión con los protocolos que utilizan las rebanadas horizontales de MEC 7,8,11,12, ya que es difícil establecer puntos de referencia para la exacta ubicación de dorsal-ventral de la rebanada. Los procedimientos aquí descritos permiten la medición precisa y consistente de la ubicación de las celdas grabadas a lo largo del eje dorsal-ventral del MEC, así como la visualización de los gradientes moleculares 2,10. Los procedimientos se han desarrollado para su uso con ratones adultos (> 28 días) y se han empleado con éxito con ratones hasta 1,5 años de edad. Con ajustes que podría ser utilizado con más jóvenes ratones u otras especies de roedores. Un sistema estandarizado de preparación y de medición ayudará a la investigación sistemática de las propiedades celulares y microcircuitos de esta zona.

Protocol

1. Preparación Slice parasagital 1,1 Disecte hemisferios cerebrales Todos los experimentos con animales deben seguir de revisión de ética local y las normativas nacionales. En el caso de los experimentos descritos aquí, el trabajo se ajusta a los animales del Reino Unido (Procedimientos Científicos) de 1986. Habitualmente usamos la dislocación cervical sin anestesia para practicar la eutanasia con el ratón antes de retirar el cerebro. Alternativamente, el rató…

Discussion

Para facilitar la investigación de las propiedades del circuito MEC que siguen a una organización dorsal-ventral que hemos descrito aquí con detalle un procedimiento para producir una preparación de corte parasagital que preserva la medida dorsal-ventral del MEC.

Los pasos críticos

Extracción del cerebro del animal. Tenga especial cuidado para evitar ejercer presión sobre el cerebro. Esto es más importante que la rápida eliminación del cer…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Somos las gracias por su apoyo: Beca de la Commonwealth del Reino Unido la financiación de la Comisión (HP), EPSRC (HP), BBSRC (NMF) y la Unión Europea, las acciones Marie Curie (NMF).

Materials

Cutting ACSF(mM) Standard ACSF(mM) Internal solution (mM) CASNumber Supplier Catalogue Number
NaCl 86 124 7647-14-5 Sigma S9888
NaH2PO4 1.2 1.2 13472-35-0 Sigma 71505
KCl 2.5 2.5 10 7447-40-7 Sigma P3911
NaHCO3 25 25 144-55-8 Fischer S/4240
Glucose 25 20 50-99-7 Sigma G5767
Sucrose 75 57-50-1 Sigma S5016
CaCl2 0.5 2 10043-52-4 VWR 190464K
MgCl2 7 1 2 7786-30-3 Sigma 63020
K Gluconate 130 299-27-4 Sigma G4500
HEPES 10 7365-45-9 Sigma H3375
EGTA 0.1 67-42-5 Sigma E4378
Na2ATP 2 34369-07-8 Sigma A7699
Na2GTP 0.3 36051-31-7 Sigma G8877
NaPhospho-Creatine 10 19333-65-4 Sigma P7936
Biocytin (optional) 2.7 576-19-2 Sigma B4261

Table 1. Cutting ACSF, standard ACSF and K-Gluconate internal solution recipes.

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Cite This Article
Pastoll, H., White, M., Nolan, M. Preparation of Parasagittal Slices for the Investigation of Dorsal-ventral Organization of the Rodent Medial Entorhinal Cortex. J. Vis. Exp. (61), e3802, doi:10.3791/3802 (2012).

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