の成長結核バイオフィルム
Summary
特定の条件下で培養すると結核菌は、薬剤耐性バイオフィルムを形成します。ここでは、培養M.ための方法を説明結核のバイオフィルムと薬剤耐性の永続化の頻度を決定する。これらのプロトコルは、M.の薬剤耐性のメカニズムにさらなる研究のために有用であろう結核 。
Abstract
結核菌は、ヒト結核の病原体は、抗生物質を含む環境ストレスに対して生き残るためには並外れた能力を持っています。ただしMのストレス耐性結核は、結核の1 6ヶ月の長期化学療法への可能性が高い貢献の一つであり、病原体のこの特徴的な表現型の根底にある分子メカニズムは不明である。多くの微生物種がバイオフィルム2から4と 呼ばれる高度に組織化され、接続された表面、およびマトリックスカプセル化された構造に自己組織化によるストレスの多い環境で生き残るために進化してきました。コミュニティの成長は、微生物の好適な生存戦略であることが表示され、表面の付着、細胞間コミュニケーション、細胞外高分子物質の合成（EPS）5,6を制御する遺伝的要素によって実現されます。環境ストレスに対する耐性はおそらくEPSによって、おそらくphysioloによって促進されるバイオフィルム7の複雑なアーキテクチャ内で異種の微小環境に個々の菌のgical適応。
最近の一連の論文では、確立されているM.結核と結核スメグマチスは、抗結核薬イソニアジドとリファンピシン8-10 50回以上最小発育阻止濃度を許容できるバイオフィルムと呼ばれる組織的な多構造で成長する強い傾向を持っています。M.結核は、しかし、興味深いことにヘッドスペースの特定の午前9時01分比で、成熟したバイオフィルムを形成するために特定の条件を満たす必要があります。メディアのほか、大気9空気の限られた交換。特殊な環境条件の要件は、おそらくそのM.実際にリンクすることができます結核は絶対ヒト病原体であり、したがって、組織の環境に適応している。この文書では、培養M.ための方法を実証する結核ボトルや細菌などの遺伝子研究のための便利な12ウェルプレートフォーマットでのバイオフィルム。我々は、M.の弱毒株のためのプロトコルを説明した病原体9のin vivo増殖に重要である2つの遺伝子座、panCDとRD1、欠失を持つ結核、MC 2 7000、。この株は、安全に、高価なBSL-3施設の要件を回避し、結核の病原体の基礎生物学を理解するためのBSL-2の封じ込めに使用することができます。メソッドは、他の培養可能なマイコバクテリア種のバイオフィルムを成長させるために、メディアの適切な変更で、拡張することができます。
全体的に、培養抗酸菌バイオフィルムの均一なプロトコルは、マイコバクテリアの基本的な弾力性のある特性の研究に興味を持って捜査に役立ちます。さらに、成長マイコバクテリアバイオフィルムの明確かつ簡潔な方法は、臨床や製薬INVを助けるestigators潜在的な薬剤の有効性をテストします。
Protocol
Discussion
結核菌の感染によって引き起こされる結核（TB）は、世界の公衆衛生にとって大きな脅威となっている。世界の人口の3分の1近くが無症候病原体に感染すると推定され、約900万の新しいケースは、結核や感染症の約170万、ダイの症状は毎年11で毎年診療所に表示されます。病気の大きな負担には、主にワクチンと六から九ヶ月にわたって投与多剤併用療法を含む非常に複雑な化?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作品は、国立衛生研究所と米国肺協会からの財政支援を行った。
Materials
| Equipment and supplies | SUPPLIER | CATALOG NUMBER |
| Incubator | VWR | Model # 1923/25 |
| Polystyrene culture bottles | Fisher Scientific | 03-374-300 |
| 12-well tissue culture plate | VWR | 62406-165 |
| 50-mL conical tubes | VWR | 89039-660 |
| Rocker | Thermo Scientific | 57019-662 |
| Chromatographic refrigerator | VWR | 55702-520 |
| petri dish | VWR | 25384-342 |
| REAGENT | SUPPLIER | CATALOG NUMBER |
| KH2PO4 (monobasic) | EMD | PX1565-1 |
| MgSO4 | Fisher | M65-500 |
| L-asparagine | Sigma | A4284-100G |
| citric acid | Sigma | C1857-100G |
| ferric ammonium citrate | Sigma | F5879-100G |
| glycerol | EMD | GX0185-5 |
| NaOH | Sigma | S8045-500G |
| ZnSO4 | Sigma | Z4750-500G |
| D-pantothenic acid | Sigma | P2250-25G |
| Difco Middlebrook 7H9 Broth | Becton Dickinson | 271310 |
| Middlebrook OADC Enrichment | BBL | 212351 |
| Tween-80 | Fisher | T164-500 |
| 250mL storage bottle | Corning | 430281 |
| 12 well plates | Falcon (BD) | 353043 |
| rifampicin | Sigma | R3501-1G |
| methanol | J.T. Baker | 9070-05 |
| 10mlLsyringe | Becton Dickinson | 301604 |
| 1-200μL pipet tips | VWR | 89079-458 |
| parafilm M | VWR | PM-996 |
| 15mL centrifuge tube | Greiner Bio-One | 188-285 |
| Difco Mycobacteria 7H11 Agar | Becton Dickinson | 283810 |
| NaCl | Fisher | BP358-1 |
| KCl | Sigma | P9333-500G |
| Na2HPO4 (dibasic) | Sigma | S0876-500G |
References
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